(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211033417.9 (22)申请日 2022.08.26 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.24484 2022.03.07 (71)申请人 甘肃省科 学院生物研究所 地址 730000 甘肃省兰州市城关区定西南 路197号 (72)发明人 刘锦霞　李娜　李晶　丁品　 武建荣　付麟雲　张建军　赵彤　 (74)专利代理 机构 兰州智和专利代理事务所 (普通合伙) 62201 专利代理师 张英荷 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/22(2020.01)A01P 3/00(2006.01) A01P 21/00(2006.01) A01G 7/06(2006.01) A01G 13/00(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种枯草芽孢杆菌及其在甘蓝种植中的应 用 (57)摘要 本发明提供了一株枯草芽孢杆菌 Bacillus   subtili ， 于2022年03月07日保藏于中国微生物 菌种保藏管 理委员会普通微生物中心， 保藏编号 为CGMCC No.24484。 该菌株耐旱、 繁 殖生长快、 在 土壤和植株中定殖能力强， 发酵液活性物质种类 丰富， 通过破坏病原菌细胞壁和细胞膜稳定性、 降低对宿主植物的浸染能力， 达到抑菌目的。 BAS‑1692菌液对甘蓝多种病原 菌有抑制活性， 对 其引发甘蓝病害防效好， 且具有促生和催芽效 果。 权利要求书1页 说明书14页 附图5页 CN 115141785 A 2022.10.04 CN 115141785 A 1.一株枯草芽孢杆菌， 该枯草芽孢杆菌是2022年3月7 日保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心的枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis ， 保藏编号为CGMCC No.24484。 2.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌， 其特征在于， 所述枯草芽孢杆菌在 分离纯化过程 中采用的分离纯化培养基配方为： 葡萄糖10 g， 蛋白胨10 g， NaCl 3 g， 牛肉膏3 g， 酵母膏3 g， MnSO4·H2O 0.005g， 琼脂粉 适 量,蒸馏水定容至10 00 mL， pH 7.0 。 3.如权利要求1所述的枯 草芽孢杆菌在甘蓝种植中的应用。 4.如权利要求1所述的枯 草芽孢杆菌的发酵 液在甘蓝种植中的应用。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述发酵液制备时的发酵培养基配方为： 牛 肉膏8 g、 酵母膏3g、 葡萄糖10g、 蒸馏水定容至10 00 mL， pH7.0 。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述发酵液中有吲哚酸类、 细胞分裂素、 植物 激素、 糖和各类氨基酸促进植物 生长发育的物质， 和环氧十 八烷酸、 衣康酸、 丝衣霉酸、 苯那 普拉利、 羟 苯基卡维地洛、 呋喃类和亚硝基噻 唑烷羧酸抑菌物质。 7.如权利要求3或4所述的应用， 其特征在于， 所述枯草芽孢杆菌在对灰葡萄孢、 尖镰孢 菌、 腐皮镰刀菌、 立枯丝核菌 、 致病假单胞菌、 盘核菌、 黑胫茎点霉中一种或任两种及以上 引发的甘蓝灰霉病 、 枯萎病、 根腐病、 褐腐病、 黑腐病、 菌核病和黑胫病 病害防控中的应用。 8.如权利要求3或4所述的应用， 其特征在于， 所述枯草芽孢杆菌在甘蓝种子萌发和植 株生长中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115141785 A 2一种枯草芽孢杆菌及其在甘 蓝种植中的应用 技术领域 [0001]本发明属于植物保护技术领域， 涉及一种枯草芽孢杆菌及其在甘蓝种植中的应 用。 背景技术 [0002]结球甘蓝 （Brassica  oleracea  var.capitata  L.， 简称甘蓝） 属于十字花科芸薹 属甘蓝种， 是我国蔬菜栽培面积较大 的一种十字花科蔬菜， 也是甘肃高原夏菜的主栽特色 蔬菜之一， 在国内外 市场需求量巨大。 市场需求导致人们为追求产量， 常年连作、 过量施肥、 大量应用化学农药等非合理种植技术， 导致土壤环境恶化， 灰霉病、 枯萎病、 根腐病、 褐腐 病、 黑腐病、 菌核病、 黑胫病、 线虫和地下害虫等病虫害发生严重， 平均减产在30%～50%， 产 品品质下降， 严重影响了当地高原夏菜产业的可持续发展。 目前当地主要通过栽种抗病品 种来对抗上述病虫害， 但是大部 分抗病品种存在口感较差， 影响经济收益， 另外抗病品种连 种连茬几次其抗病能力也下降， 防控稳定性不足。 因此， 寻求新的防控技术势在必行。 本发 明针对甘蓝枯萎病、 根腐病、 褐腐病、 黑腐病、 黑胫病等影响产品产量和品质的多发病害， 从 甘蓝发病植株选育高效、 广谱、 抗逆、 定殖能力强的生防菌种， 为特色高原夏菜甘蓝连作病 害防控提供新的防控 途径。 发明内容 [0003]本发明的第一个目的是提供一种枯草芽孢杆菌， 该枯草芽孢杆菌具有耐旱、 繁殖 生长快、 在甘蓝及其根围土壤定殖能力强， 通过破坏病原菌细胞壁和细胞膜稳定性、 降低对 宿主植物的浸染能力， 达 到抑菌防病的目的。 [0004]上述枯草芽孢杆菌是2022年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心的枯 草芽孢杆菌 Bacillus subtilis， 保藏编号 为CGMCC No.24484。 [0005]所述枯草芽孢 杆菌Bacillus  subtilis 是从甘肃省榆中县高敦营村枯萎病危害的 甘蓝植株中分离优选得到的菌株BAS ‑1692， 经过形态观 察、 生理生化鉴定和16S  r DNA分子 鉴定最终确定该菌株为 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis。 [0006]所述枯草芽孢 杆菌Bacillus  subtilis 在分离纯化过程中采用的分离纯化培养基 配方为： 葡萄糖10  g， 蛋白胨10  g， NaCl 3  g， 牛肉膏3  g， 酵母膏3  g MnSO4·H2O 0.005g， 琼 脂粉 适量,蒸馏水1000  mL， pH 7.0。 该分离纯化培养基有利于枯草芽孢杆菌富集， 提高其 分离纯化效率。 [0007]所述枯草芽孢杆菌 Bacillus  subtilis 耐旱， 能耐受模拟环境的重度干旱， 即 PGE6000浓度为15 0～270g/L均能生长 繁殖。 [0008]所述枯草芽孢 杆菌Bacillus  subtilis 发酵液制备时的发酵培养基配方为牛肉膏 8 g、 酵母膏3g、 葡萄糖10g、 蒸馏水容至1000  mL， pH7.0。 该发酵培养基促进枯草芽孢杆菌生 长繁殖， 培养48h其发酵 液含菌量大于1012cfu/ml， 抑菌活性显著提高。 [0009]所述枯草芽孢杆菌 Bacillus  subtilis 繁殖速度快， 发酵培养20小时发酵液活菌说　明　书 1/14 页 3 CN 115141785 A 3