(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210771839.X (22)申请日 2022.06.30 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M 202145 0 2021.04.25 (71)申请人 塔里木大 学 地址 843300 新疆维吾尔自治区阿拉尔市 塔里木大道 (72)发明人 张利莉　刘占文　万传星　骆新荣　 夏占峰　罗晓霞　任强　姚宇翔　 (74)专利代理 机构 西安鼎迈知识产权代理事务 所(普通合伙) 6126 3 专利代理师 刘喜保 (51)Int.Cl. C12P 17/18(2006.01) C12N 1/20(2006.01)A01N 43/90(2006.01) A01P 1/00(2006.01) A01P 3/00(2006.01) C12R 1/465(2006.01) (54)发明名称 一种新物种来源硫藤黄菌素的制备方法及 应用 (57)摘要 本 发 明 涉 及 一 种 S t r e p t o m y c e s p opuliradicisTRM70303产硫藤黄菌素的制备方 法和应用。 本发 明利用从新 疆塔克拉玛干沙漠胡 杨根际 土壤中分离得到的放线菌新物种 Streptomycespopulir adicisTRM70303， 经其培 养获得发酵液经分离纯化获得硫藤黄菌素， 产量 为0.27mg/mL， 与现已有技术披露报道的硫藤黄 菌素制备方法相比， 产量大幅提高、 制备过程简 单、 菌株发酵水平高、 成本低、 发酵周期短； 通过 抑菌活性实验测试证实本发明获得的硫藤黄菌 素对棉花黄萎病菌、 棉花枯萎病菌、 香梨腐烂病、 梨火疫病、 志贺氏杆菌、 梨黑斑病、 鲍曼不动杆菌 具有广谱而高效的拮抗活性， 对植物病害以及细 菌性感的染防控具有重要的应用价值和良好的 开发前景。 权利要求书1页 说明书10页 序列表1页 附图5页 CN 115261422 A 2022.11.01 CN 115261422 A 1.一种Streptomyces  populiradicis  TRM70303产硫藤黄菌素 的制备方法， 其特征在 于， 将菌株Strep tomyces populiradicis TRM70303的单菌落接种于TSB培养基中， 于33℃、 120rpm培养3天， 得Streptomyces  populiradicis  TRM70303种子液； 将Streptomyces   populiradicis  TRM70303种子 液， 按照体积比为1％的接种量接入到燕麦液体培养基， 于33 ℃、 120rpm发酵培养5天， 得Streptomyces  populiradicis  TRM70303发酵液； 收集发酵液， 过滤后上样 于D101型号大孔树脂， 100％甲醇洗脱， 收集洗脱液， 于50℃减压浓缩， 获得片状 晶体硫藤黄 菌素。 2.如权利要求1所述的一种Streptomyces  populiradicis  TRM70303产硫藤黄菌素 的 制备方法， 其特征在于， 所述Strepto myces populiradici s TRM70303菌株保藏于中国典型 培养物保藏中心， 菌种保藏 号为CCTCC No： M202145 0。 3.如权利要求1所述的一种Streptomyces  populiradicis  TRM70303产硫藤黄菌素 的 制备方法， 其特征在于， 所述Strep tomyces populiradicis TRM70303的基因序列如SEQ  ID  NO： 1所示。 4.如权利要求1所述的一种Streptomyces  populiradicis  TRM70303产硫藤黄菌素 的 制备方法， 其特征在于， 所述Streptomyces  populiradicis  TRM70303的分离培养基为： 可 溶性淀粉20g/L， KNO3 1g/L， K2HPO4 0.5g/L， MgSO4·7H2O 0.5g/L， NaCl  0.5g/L， FeSO4· 7H2O 0.01g/L， 琼脂18g/L， 土壤浸提液10 00mL， pH7.5 。 5.如权利要求1所述的一种Streptomyces  populiradicis  TRM70303产硫藤黄菌素 的 制备方法， 其特征在于， 所述Streptomyces  populiradicis  TRM70303的纯化培养基为： 可 溶性淀粉10.0g、 K2HPO4 1.0g、 MgSO4·7H2O 1.0g、 NaCl  1.0g、 (NH4)2SO4 2.0g、 CaCl2 2.0g、 FeSO4·7H2O 0.001g、 MnSO4 0.001g、 ZnSO4·7H2O 0.001g、 琼脂15.0g、 蒸馏水1.0L、 pH  7.2。 6.一种如权利要求1所述的Streptomyces  populiradicis  TRM70303产硫藤黄菌素制 备方法制备的硫藤黄菌素在制备防治棉花枯萎病、 棉花黄萎病、 香梨腐烂病， 梨火疫病、 志 贺氏杆菌、 鲍曼不动杆菌药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261422 A 2一种新物种来源硫藤黄菌素的制备方 法及应用 技术领域 [0001]本发明涉及微生物菌种及其应用的技术领域， 具体涉及一种放线菌新物种 Streptomyces  populiradicis TRM70303产硫藤黄 菌素的制备 方法和应用技 术领域。 背景技术 [0002]农业病虫害是我国农业上的主要灾害， 据联合国粮农组织(FAO)的统计， 每年 因遭 受植物病害引起的减产 平均损失为总 产量的10％ ‑15％。 农用抗生素发展迅速， 并且新产品 不断的投放市场， 但终因生产水平太低、 生产成本过高、 防治效率低下等原因， 很大程度上 限制了在经济作物上的高效使用。 [0003]人类对环保的呼声越来越高， 化学农药的开发难度也越来越大。 作为生物防治重 要内容的农用抗生素已经成为研究开 发的热点。 解决这一系列新问题的办法之一就是大量 寻找和发现新的生物活性物质， 微生物抗生素 的研究已成为 我国科学研究的重点。 作为获 得先导化合物的基础和源泉， 菌株资源的获取至关重要， 尤其是极端环境微生物抗生素 的 合成研究更 是学术界研究的热点领域。 [0004]沙漠作为特殊生态环境， 具有太阳辐射强烈、 水分蒸发量大、 极度干旱炎热、 营养 贫瘠、 土壤盐渍化等特点。 为适应自然环境， 微生物在长期生活及 进化过程中形成其特有的 代谢物质， 这些物质具有很高的研究和 开发价值， 也是寻找新型活性次级代谢产物的重要 资源。 [0005]硫藤黄菌素是一种具有广谱抗菌活性的二硫吡咯酮类抗生素， 现有的采用微生物 发酵制备硫藤黄菌素虽然有报道， 中 国专利(“硫藤黄菌素二氧化物及其衍生物在制备用于 治疗CNS疾病的药物中的用途及其制备方法 ”， CN1279906C)公开了采用诺卡氏菌种ST   100692,DSM  13834生产硫藤黄菌素二氧化物， 以及文 献(“微生物来源白细胞介素 ‑4受体拮 抗剂的筛选 ”， 王柯等， 中国新药杂志， 2007,16(14)： 1088 ‑1090)公开了采用链霉菌4849发 酵液分离纯化得到含有金丝菌素、 硫藤黄菌素和4,7 ‑二甲氧基异黄酮三种化合物， 但硫藤 黄菌素的产量均不高， 制备过程复杂且成本较高、 原始菌株发酵水平低； 化学合成生产硫藤 黄菌素步骤复杂， 且存在高温、 高压、 强酸、 强碱等较为极端的化工过程， 生产安全性低、 环 境污染较重； 同时已有技术报道硫藤黄菌素对金黄 色葡萄球菌、 肺炎克雷伯菌、 铜绿假单胞 菌、 肿瘤细胞等有良好的活性， 但对棉花枯萎病、 棉花黄萎病、 香梨腐烂病， 梨火疫病、 志贺 氏杆菌、 鲍曼不动杆菌是否有抑制作用还未 见报道。 发明内容 [0006]针对现有硫藤黄菌素的制 备过程复杂、 成本高， 安全性低、 环境污染较重、 利用微 生物发酵产量低， 且未见有文献和专利记载有关Streptomyces  populiradicis发酵制备硫 藤黄菌素的技术现状， 本发明旨在于提供一种放线菌新物种Streptomyces  populiradicis   TRM70303产硫藤黄菌素的制备方法和应用。 利用从新 疆塔克拉玛干沙漠胡杨 根际土壤中分 离得到的放线菌新物种Strepto myces populiradicis TRM70303， 发酵、 分离 纯化获得化合说　明　书 1/10 页 3 CN 115261422 A 3