(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210588803.8 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 广州朴成生物科技有限公司 地址 511300 广东省广州市增城区增江街 经三路5号(厂房A1)二层之三 (72)发明人 张丽　黄金凤　谭荣炳　温程　 欧阳海燕 　黄金珠　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 刘明星　朱聪聪 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01) A23K 50/30(2016.01) A23K 50/60(2016.01)A23K 10/18(2016.01) A61K 33/04(2006.01) A61K 35/747(2015.01) A61P 1/12(2006.01) A61P 37/04(2006.01) C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称 一种改善断奶仔猪腹泻的富硒加氏乳杆菌 菌剂的制备方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种改善断奶仔猪腹泻的富 硒加氏乳杆菌菌剂的制备方法及应用。 是将加氏 乳杆菌接种到发酵转化培养基中发酵， 发酵温度 30‑37℃， 发酵5 ‑9小时后， 以变速流加的方式流 加已灭菌冷却的亚硒酸钠， 维持硒浓度为10 ‑100 μg/ml， 控制整个转化发酵过程pH5.0 ‑6.0， 温度 28‑35℃， 转化发酵时间24 ‑36小时， 由此制得改 善仔猪断奶腹泻的富硒加氏乳杆菌菌剂。 本发明 发现， 控制加入 无机硒化合物的时间和严格控制 pH在5.0‑6.0之间， 菌体细胞无机硒转化有机硒 的效率最高。 权利要求书1页 说明书8页 CN 115161221 A 2022.10.11 CN 115161221 A 1.一种改善断奶仔猪腹泻的富硒加氏乳杆菌菌剂的制备方法， 其特征在于， 是将加氏 乳杆菌接种到发酵转化培养基中发酵， 发酵温度30 ‑37℃， 发酵5 ‑9小时后， 以变速流加的方 式流加已灭菌 冷却的亚硒酸钠， 维持硒浓度为10 ‑100 μg/ml， 控制整个转化发酵过程pH5.0 ‑ 6.0， 温度28 ‑35℃， 转化发酵时间24 ‑36小时， 由此制得改善仔猪断奶腹泻的富硒加氏乳杆 菌菌剂。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述的发酵转化培养基是每升含有氯 化钠： 10‑20g、 糖蜜10 ‑30g、 大豆蛋白胨5 ‑10g、 酵母抽提物1 ‑5g、 亚硒酸钠3 ‑8mg、 碳酸钙10 ‑ 30g， pH 6.8。 3.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述的发酵是在发酵罐中发酵， 发酵 罐的装液量是6 0‑70％体积。 4.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述的加氏乳杆菌是以一级种子液的 形式按照体积比3 ‑8％的比例接种到发酵转化培养基中， 所述的一级种子液是浓度为： 5.0 ×108cfu/mL～ 2.0×109cfu/mL的菌液。 5.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述的一级种子液是浓度为： 9.2 × 108cfu/mL～1.6 ×109cfu/mL的菌液。 6.根据权利要求4或5所述的制备方法， 其特征在于， 所述的一级种子液是通过以下方 法制备的： 将液体菌种以3 ‑6％的接种量转接到含有一级发酵培养基的发酵罐中， 发酵罐装液量 为70‑80％， 发酵温度37 ±1℃， 密闭静置 培养， 发酵时间为16 ‑24小时， 制成一级种子液； 所述的一级发酵培养基每升含有蛋白胨10g、 葡萄糖3g、 酵母粉5g、 牛肉膏10g、 乙酸钠 5g、 柠檬酸氢二胺2g、 磷酸氢二钾2g、 硫酸镁0.2g、 硫酸锰0.05g、 吐温80  1mL、 碳酸钙10g， pH6.8； 所述的液体菌种是5.0 ×108cfu/mL～ 2.0×109cfu/mL的加氏乳杆菌 菌液. 7.根据权利要求6所述的制备方法， 其特征在于， 所述的液体菌种是6.2 ×108cfu/mL～ 9.8×108cfu/mL的加氏乳杆菌 菌液。 8.根据权利要求7所述的制备方法， 其特征在于， 所述的液体菌种是通过以下方法制备 的： 将加氏乳杆菌CGMCC  1.3224， 划线接种到改良的MRS琼脂试管斜面， 37 ±1℃培养18 ‑28 小时； 然后转接 到改良的MRS液体培 养基中， 37 ±1℃静置培养18h‑30h， 获得液体菌种； 所述的改良的MRS液体培养基每升含有蛋白胨10g、 葡萄糖3g、 酵母粉5g、 牛肉膏10g、 乙 酸钠5g、 柠檬酸氢二胺2g、 磷酸氢二钾2g、 硫酸镁0.2g、 硫酸锰0.05g、 吐温80  1mL、 碳酸钙 10g， pH6.8， 所述的改良的MRS琼脂是在改良的MRS液体培 养基上加入20g/L的琼脂 。 9.权利要求1 ‑8任一制备方法制备得到的富硒加氏乳杆菌菌剂在改善断奶仔猪腹泻的 制剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115161221 A 2一种改善断奶仔猪腹泻的富硒加氏乳杆菌 菌剂的制备方 法及 应用 技术领域： [0001]本发明属于家畜饲养领域， 具体涉及一种改善断奶仔猪腹泻的富硒加氏乳杆菌菌 剂的制备 方法及应用。 背景技术： [0002]断奶仔猪腹泻是猪场常见的问题 之一， 因仔猪在 早期断奶时期因自身消化系统和 免疫功能尚未成熟， 会导致仔猪出现腹泻， 一般腹泻率在20％～30％左右， 病死率达10％～ 15％， 发病仔猪生长迟缓， 形成僵猪， 甚至死亡， 给养猪生产带来了巨大的经济损失。 现仔猪 断奶腹泻多 添加抗生素、 高剂量微量元素等进行治疗， 在降低腹泻的同时， 也带来了畜产品 抗生素残留、 肠道 微生态失调以及病原菌耐药性增加等问题， 并严重的污染了养殖环境， 对 人类健康构成了严重的威胁。 因此， 降低断奶仔猪的腹泻， 提高断奶仔猪的免疫力及营养物 质消化率， 寻找环保有效的抗 生素替代品对生猪绿色养殖、 健康发展， 具有重要作用。 [0003]硒是人体和动 物所必需的微量元素， 具有参与机体免疫调节、 预防癌症、 抑制病原 菌等重要的生理学功 能， 也是哺乳动物体内许多酶活性中心的必需组分， 如谷胱甘肽过氧 化物酶、 脱碘酶等， 具有保护 细胞免受过度氧化损伤的作用。 加氏乳杆菌在生长过程中会产 生乳酸菌素、 乳酸、 过氧化氢、 胞外多糖、 氨基酸等代谢产物， 这些代谢产物具有增强免疫 力、 杀菌抑菌、 维持肠道菌群平衡等功效。 本发明以加氏乳杆菌为载体通过菌体发酵过程的 消化吸收代谢， 制备一种改善 断奶仔猪腹泻的富硒加氏乳杆菌， 可有效降低断奶仔猪的腹 泻率， 提高断奶仔猪的免疫力 及营养物质消化率， 降低断奶仔猪病死率， 提高生猪养殖的生 产成绩， 降低养殖成本。 目前未见有关改善 断奶仔猪腹泻的富硒加氏乳杆菌菌剂的制备方 法相关专利。 发明内容： [0004]本发明的目的是提供一种能有效的提高有机硒转化效率的改善断奶仔猪腹泻的 富硒加氏乳杆菌 菌剂的制备 方法及应用。 [0005]本发明的提高有机硒转化效率的改善断奶仔猪腹泻的富硒加氏乳杆菌菌剂的制 备方法， 其是将加氏乳杆菌接种到发酵转化培养基中发酵， 发酵温度30 ‑37℃， 发酵5 ‑9小时 后， 以变速流加的方式流加已灭菌冷却的亚硒酸钠， 维持硒浓度为10 ‑100 μg/ml， 控制整个 转化发酵过程pH  5.0‑6.0， 温度28 ‑35℃， 转化发酵时间24 ‑36小时， 由此制得改善仔猪断奶 腹泻的富硒加氏乳杆菌 菌剂。 [0006]经富硒含量和加氏乳杆菌活菌数检测， 菌液有机硒含量8 ‑90 μg/mL， 转化率80％以 上， 加氏乳杆菌活菌数6.0 ×108cfu/mL～3.0 ×109cfu/mL。 [0007]优选， 所述的发酵转化培养基是每升含有氯化钠： 10 ‑20g、 糖蜜10 ‑30g、 大豆蛋白 胨5‑10g、 酵母抽提物1 ‑5g、 亚硒酸钠3 ‑8mg、 碳酸钙10‑30g， pH 6.8。 [0008]优选， 所述的发酵 是在发酵 罐中发酵， 发酵 罐的装液量是6 0‑70％体积。说　明　书 1/8 页 3 CN 115161221 A 3