(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210709426.9 (22)申请日 2022.06.22 (71)申请人 上海龙殷生物科技有限公司 地址 201499 上海市奉贤区环城东路383号 2幢10楼A01室 (72)发明人 张鹏　石化兵　黄瑞　余标　 唐春雨　李庆廷　 (74)专利代理 机构 上海九泽 律师事务所 313 37 专利代理师 蔡佳杰 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 15/70(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 一种提高感受态细胞转 化率的方法 (57)摘要 本发明公开了一种提高感受态细胞转化率 的方法， 在感受态细胞的制备或存放的过程中加 入糖脂类生物表面活性剂， 从而显著提高感受态 细胞的转 化率。 权利要求书1页 说明书5页 CN 114958684 A 2022.08.30 CN 114958684 A 1.一种提高感受态细胞转化率的方法， 其特征在于， 在感受态细胞的制备或存放的过 程中加入糖脂类生物 表面活性剂。 2.根据权利要求1所述的一种提高感受态细胞转化率的方法， 其特征在于， 所述的糖脂 类生物表面活性剂包括槐糖脂或鼠李糖脂 。 3.根据权利要求2所述的一种提高感受态细胞转化率的方法， 其特征在于， 所述槐糖脂 的浓度为： 0.5～1g/L， 所述鼠李糖脂的浓度为： 1～ 2g/L。 4.根据权利要求3所述的一种提高感受态细胞转化率的方法， 其特征在于， 所述感受态 细胞的制备 过程包括如下步骤： 步骤1.1： 将大肠杆菌在LB琼脂平板上划线， 37℃培 养16～20h； 步骤1.2： 在划线平板上挑一个单菌落于盛 有20mL LB培养基的25 0mL三角瓶中； 37℃振荡培 养到细胞的OD6 00值为0.3～0.5之间； 步骤1.3： 将培养物于冰溶中放置10min， 然后转移到10mL预冷的无菌离心管中， 4000r/ min， 0℃～4℃离心10mi n； 步骤1.4： 弃 上清， 倒置 离心管1mi n， 流尽剩余液体后， 置 于冰浴10mi n； 步骤1.5向离心管加入5mL用冰预冷的0.1mo l/L CaCl2溶液悬浮细胞， 置冰浴中20mi n； 步骤1.6： 4000r/min， 0℃～4℃离心10min回收菌体， 弃上清， 向离心管加入1mL冰冷的 0.1mol/L CaCl2溶液， 重新悬浮细胞； 步骤1.7： 按每份200μL分装细胞于无菌小塑料离心管中， 加入浓度为50％的无菌甘油 200 μL， 混合作为感受态细胞置 ‑20℃存放备用。 5.根据权利要求4所述的一种提高感受态细胞转化率的方法， 其特征在于， 在所述步骤 1.2的LB培 养基中添加浓度为0.5～1g/L槐糖脂或浓度为1～ 2g/L鼠李糖脂 。 6.根据权利要求4所述的一种提高感受态细胞转化率的方法， 其特征在于， 在所述步骤 1.5的CaCl2溶液中添加浓度为1g/L鼠李糖脂 。 7.根据权利要求4所述的一种提高感受态细胞转化率的方法， 其特征在于， 在所述步骤 1.7的无菌甘油中添加浓度为1g/L槐糖脂或浓度为1g/L鼠李糖脂 。 8.根据权利要求4所述的一种提高感受态细胞转化率的方法， 其特征在于， 在所述步骤 1.2的LB培养基中添加浓度为1g/L槐糖脂， 并且在所述步骤1.7的无菌甘油中添加浓度为 1g/L槐糖脂 。 9.根据权利要求4所述的一种提高感受态细胞转化率的方法， 其特征在于， 在所述步骤 1.2的LB培养基中添加浓度为1 g/L鼠李糖脂， 并且在所述步骤1.7的无菌甘油中添加浓度为 1g/L鼠李糖脂 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958684 A 2一种提高 感受态细胞转化 率的方法 技术领域 [0001]本发明涉及 生命科学基因操作工具领域， 特别是涉及一种提高感受态细胞转化率 的方法。 背景技术 [0002]转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞， 使之获得新的遗传性状 的一种手段， 它是微生物遗传、 分子遗传、 基因工程等研究领域的基本实验技术。 转化效率 的高低决定后续分子操作工作的开展效率与成功 率， 而细菌的状态是影响转化效率最关键 的因素之一。 已发现在许多细菌中均能发生转化现象。 转化成功 率与某些 因子密切相关， 例 如受体菌处于感受态阶段可产生感受态因子， 是接受外来DNA片段的最佳时期， 而钙离子、 环腺苷酸(cAMP)等物质亦可 大大提高转 化率。 [0003]然而， 目前对于提高细菌转化效率的研究还有待进一步提升。 从20世纪70年代开 始， 一直持续到今天， 公开技术领域已经报道了许多在细菌转化的基本技术方面的创新， 这 些技术创新的主要目的是为了提高质粒转化不同菌株的效率， 包括： 在不同的缓冲液中使 用二价阳离子的复杂 混合液， 用还原剂处理细胞， 调整混合液的成分以适应不同遗传背景 的特殊菌株， 在生长周期的特定阶段收获细胞， 在加入化学试剂之前改变培养温度， 优化热 激的程度和温度， 冷冻和融化细胞， 在用二 价阳离子溶液洗涤后在 细胞中加入有机溶剂。 发明内容 [0004]基于上述情况， 我们 公开了一种提高感受态细胞转化率的方法， 解决上述技术问 题。 [0005]本发明提供了一种提高感受态细胞转 化率的方法。 [0006]为了解决上述 技术问题， 本发明提供如下技 术方案： [0007]一种提高感受态细胞转化率的方法， 在感受态细胞的制备或存放的过程中加入糖 脂类生物 表面活性剂。 [0008]优选的， 所述的糖脂类生物 表面活性剂包括槐糖脂或鼠李糖脂 。 [0009]优选的， 所述槐糖脂的浓度为： 0.5～1g/L， 所述鼠李糖脂的浓度为： 1～ 2g/L。 [0010]优选的， 所述感受态细胞的制备 过程包括如下步骤： [0011]步骤1.1： 将大肠杆菌在LB琼脂平板上划线， 37℃培 养16～20h； [0012]步骤1.2： 在划线平板上挑一个单菌落于盛 有20mL LB培养基的25 0mL三角瓶中； [0013]37℃振荡培 养到细胞的OD6 00值为0.3～0.5之间； [0014]步骤1.3： 将培养物于冰溶中放置10min， 然后转移到10mL预冷的无菌离心管中， 4000r/min， 0℃～4℃离心10mi n； [0015]步骤1.4： 弃 上清， 倒置 离心管1mi n， 流尽剩余液体后， 置 于冰浴10mi n； [0016]步骤1.5向离心管加入5mL用冰预冷的0.1mol/L  CaCl2溶液悬浮细胞， 置冰浴中 20min；说　明　书 1/5 页 3 CN 114958684 A 3