(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210638715.4 (22)申请日 2022.06.07 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M 202 2094 202 2.01.19 (71)申请人 江南大学 地址 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大 道1800号 (72)发明人 徐美娟　饶志明　吴洁琴　夏博雅　 杨套伟　张显　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权 代理有限公司 2321 1 专利代理师 赵巧娜 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/21(2006.01)C07K 7/58(2006.01) A61K 35/742(2015.01) A61K 38/12(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A23L 33/18(2016.01) A23L 33/135(2016.01) A23K 20/147(2016.01) A23K 10/18(2016.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 1/00(2006.01) C12R 1/10(2006.01) (54)发明名称 一种提高地衣芽孢杆菌产杆菌肽的方法 (57)摘要 本发明公开了一种提高地衣芽孢杆菌产杆 菌肽的方法， 属于微生物技术领域。 本发明从饲 料样品中筛选获得高产杆菌肽的地衣芽孢杆菌 ATH， 通过基因工程的方法在地衣芽孢杆菌ATH内 表达枯草芽孢杆菌来源的乙酰辅酶A合成酶 Bsacs基因， 增加胞内杆菌肽组成氨基酸的供给， 提高杆菌肽效价。 将得到的重组地衣芽孢杆菌接 种至含豆粕粉的发酵培养基中发酵培养42h后， 得到的杆菌肽效价为1928IU/mL， 比出发菌株ATH 杆菌肽效价提高了46.16％， 同时杆菌肽A的含量 为1081IU/mL， 与出发菌株相比， 提高了37.2％。 整个发酵过程产杆菌肽效率高， 原料成本低， 且 方法简单， 易于操作。 权利要求书1页 说明书6页 序列表6页 附图4页 CN 114874950 A 2022.08.09 CN 114874950 A 1.一株地衣芽孢杆菌(Bacillus  lichenifor mis)ATH， 已于2022年1月19日保藏于中国 典型培养物保藏中心， 保藏编号 为CCTCC NO： M 2022094， 保藏 地址为中国， 武汉， 武汉大 学。 2.一种抑菌剂， 其特征在于， 所述抑菌剂中含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌ATH， 或 其发酵液。 3.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌ATH在制备抑制细菌的产品中的应用。 4.如权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述细菌包括但不 限于大肠杆菌、 谷氨酸棒 杆菌、 金黄色葡萄球菌、 蜡样芽孢杆菌 。 5.一种重组地衣芽孢杆菌， 其特征在于， 以权利要求1所述的地衣芽孢杆菌ATH为宿主 细胞， 表达 了氨基酸序列如SEQ  ID NO.2所示的乙酰辅酶A合成 酶。 6.氨基酸序列如SEQ  ID NO.2所示的乙酰辅酶A合成酶在提 高权利要求1所述的地衣芽 孢杆菌产杆菌肽的产量中的应用。 7.一种制备杆菌肽的方法， 其特征在于， 采用权利要求1所述的地衣芽孢杆菌ATH或权 利要求5所述的重组地衣芽孢杆菌发酵， 制备 得到发酵 液， 从发酵 液中提取分离得到 。 8.采用权利要求7 所述的方法制备 得到的杆菌肽。 9.含有权利要求8所述的杆菌肽的药品、 保健品或饲料 添加剂。 10.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌ATH， 或权利要求5所述的重组地衣芽孢杆菌， 或权 利要求7所述的方法在制备含有杆菌肽的产品中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114874950 A 2一种提高地衣芽孢杆菌产杆菌肽的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及一种提高地衣芽孢杆菌产杆菌肽的方法， 属于生物技 术领域。 背景技术 [0002]杆菌肽是一种由枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)、 地衣芽孢杆菌(Bacillus   licheniformis)发酵得到的多肽类光谱抗生素， 包括Orn、 D ‑Phe、 His、 D ‑Asp、 Asn、 Lys、 D ‑ Glu、 Cys、 Leu和Ile， 是由多种环状同系物组成， 分别为杆菌肽A、 B1、 B2、 B3、 C1、 C2、 C3、 F， 其 中杆菌肽A和B占95％的活性， 其产量合 成受多基因决定， 且代谢网络复杂， 其主要生产菌株 是枯草芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌， 杆菌肽的抑菌作用是由于对细菌细胞壁的形成有抑制作 用， 从而抑制革兰氏阳性细菌和部 分革兰氏阴性菌， 在动物养殖过程中， 广泛应用于饲料添 加。 [0003]杆菌肽合成所需组成氨基酸来源于EMP途径和TCA循环， 地衣芽孢杆菌中的碳氮代 谢受到严格的调控， 大量的碳源经EMP途径转化为丙酮酸和乙酰辅酶A， 然后转化为溢流代 谢产物乳酸、 乙酸和乙偶姻等， 乙酰辅酶A作为细胞内代谢 的重要中间产物， 是合成多种生 物基化学品的重要前体。 而同时乙酸的积累一方面会抑制大肠杆菌的生长和代谢， 另一方 面会导致碳原子损失和目标产 物产率降低。 因此急需找到一种降低乙酰CoA的分解途径， 减 少乙酸积累， 并能提高地衣芽孢杆菌产杆菌肽的方法。 发明内容 [0004]为解决上述技术问题 ， 本发明提供了一株地衣芽孢杆菌 (Bacillus   licheniformis)ATH， 已于2022年1月19日保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏编号为 CCTCC NO： M 2022094， 保藏 地址为中国， 武汉， 武汉大 学。 [0005]在本发明的一种实施方式中， 所述地衣芽孢杆菌ATH来源于饲料样品， 将筛选后菌 株的通过16S  rDNA进行测序， 菌株鉴定结果为地衣芽孢杆菌(Bacillus  licheniformis)， 将该菌株命名为Baci llus licheniformis ATH。 [0006]本发明还提供了一种微 生物菌剂， 所述 微生物菌剂中含有上述 地衣芽孢杆菌ATH 。 [0007]本发明还提供了一种产品， 所述产品中含有上述 地衣芽孢杆菌ATH 。 [0008]在本发明的一种实施方式 中， 所述产品包括但不限于抑菌剂、 农药。 [0009]本发明还提供了上述 地衣芽孢杆菌ATH在制备抑制细菌的产品中的应用。 [0010]在本发明的一种实施方式中， 所述细菌包括但不限于大肠杆菌、 谷氨酸棒杆菌、 金 黄色葡萄球菌、 蜡样芽孢杆菌 。 [0011]本发明还提供了一种重组地衣芽孢杆菌， 所述重 组地衣芽孢杆菌以上述地衣芽孢 杆菌ATH为宿主细胞， 过表达 了乙酰辅酶A合成 酶ACS。 [0012]在本发明的一种实施方式中， 所述乙酰辅酶A合成酶ACS的氨基酸序列如SEQ  ID  NO.2所示。 [0013]在本发明的一种实施方式中， 编码所述乙酰辅酶A合成酶ACS的核苷酸序列如SEQ  说　明　书 1/6 页 3 CN 114874950 A 3