(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210602495.X (22)申请日 2022.05.30 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.23546 2021.10.09 CGMCC NO.1.1273 5 2020.07.20 CGMCC NO.24109 2021.12.15 (71)申请人 微康益生菌 （苏州） 股份有限公司 地址 215200 江苏省苏州市吴江经济技 术 开发区龙桥路10 33号 (72)发明人 方曙光　蒋大成　陈珂可　冯胜鹏　 朱建国　严涛　程文　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 专利代理师 刘二艳(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/04(2006.01) A23L 33/135(2016.01) A23K 10/18(2016.01) A61K 35/747(2015.01) C12R 1/23(2006.01) (54)发明名称 一种提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物及其 制备方法和应用 (57)摘要 本发明提供一种提高嗜酸乳杆菌抗逆性的 组合物及其制备方法和应用。 所述组合物包括嗜 酸乳杆菌LA85、 嗜酸乳杆菌LA05和嗜酸乳杆菌 LA88。 本发明所述的制备方法通过多联 发酵制备 方法使菌体具有良好的抗逆性能力， 可以在人体 肠胃中达到较强耐消化及耐温性的嗜酸乳杆菌， 同时通过菌体的协同作用使所述的益生菌达到 更高活性的功效， 利用此益生菌制备方法的嗜酸 乳杆菌可以提升菌体生长活性， 降低其面对胁迫 环境的损伤， 达 到提升抗逆性的功效。 权利要求书2页 说明书16页 CN 114891685 A 2022.08.12 CN 114891685 A 1.一种提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物， 其特征在于， 所述组合物包括嗜酸乳杆菌 LA85、 嗜酸乳杆菌LA0 5和嗜酸乳杆菌LA8 8； 所述嗜酸乳杆菌LA85为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus  acidophilus)LA85， 保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏时间为2020年7月20日， 保藏编号为 CGMCC NO.1.1273 5， 保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号； 所述嗜酸乳杆菌LA05为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus  acidophilus)LA05， 保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏时间为2021年10月9日， 保藏编号为 CGMCC NO.23546， 保藏 地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号； 所述嗜酸乳杆菌LA88为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus  acidophilus)LA88， 保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏时间为2021年12月15日， 保藏编号为 CGMCC NO.24109， 保藏 地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 2.根据权利要求1所述的提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物， 其特征在于， 所述 嗜酸乳杆 菌LA85、 嗜酸乳杆菌LA0 5和嗜酸乳杆菌LA8 8的质量比为(4 ‑12):(2.5 ‑15):(1‑3.5)。 3.一种根据权利要求1或2所述的提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物的制备方法， 其特征 在于， 所述制备 方法具体包括以下步骤： (1)将嗜酸乳杆菌LA85、 嗜酸乳杆菌LA05和嗜酸乳杆菌LA88混合接种于种子培养基中， 进行一级培养， 得到一级种子液， 再将一级种子液接种于种子培养基中， 进行二级培养， 得 到二级级种子液， 最后将二级级种子液接种于高密度培养基中， 进 行高密度发酵， 得到发酵 液； (2)将发酵液离心后， 收集菌泥， 将菌泥和保护剂 混合， 冷冻干燥， 得到所述提高嗜酸乳 杆菌抗逆性的组合物。 4.根据权利要求3所述的提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物的制备方法， 其特征在于， 步 骤(1)中， 所述种子培养基按质量浓度计包括如下组分： 葡萄糖18 ‑22g/L、 牛肉浸粉8 ‑12g/ L、 酵母粉4 ‑6g/L、 蛋白胨8 ‑12g/L、 乙酸钠4 ‑6g/L、 柠檬酸钠1 ‑3g/L、 磷酸氢二钾 2‑4g/L、 硫 酸镁0.4‑0.6g/L、 硫酸锰0.05 ‑0.2g/L、 吐温80  0.5‑1.5g/L、 L ‑半胱氨酸盐酸盐0.5 ‑1.5g/ L； 优选地， 步骤(1)中， 所述种子 培养基需在1 10‑120℃下灭菌15 ‑25min； 优选地， 步骤(1)中， 所述混合接种的总接种量 为1‑5vol％； 优选地， 步骤(1)中， 所述一级培养为静置培养， 一级培养的温度为30 ‑40℃， 一级培养 的时间为5 ‑24h； 优选地， 步骤(1)中， 所述 一级种子液在种子 培养基中的接种量 为1‑5vol％； 优选地， 步骤(1)中， 所述二级培养为静置培养， 二级培养的温度为30 ‑40℃， 二级培养 的时间为5 ‑24h。 5.根据权利要求3或4所述的提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物的制备方法， 其特征在 于， 步骤(1)中， 所述高密度培养基按质量浓度计包括如下 组分： 葡萄糖38 ‑42g/L、 牛肉浸粉 14‑16g/L、 酵母粉8 ‑12g/L、 蛋白胨8 ‑12g/L、 乙酸钠4 ‑6g/L、 柠檬酸钠1 ‑3g/L、 磷酸氢二钾2 ‑ 4g/L、 硫酸镁0.4 ‑0.6g/L、 硫酸锰0.05 ‑0.2g/L、 吐温80  0.5‑1.5g/L、 L ‑半胱氨酸盐酸盐 0.5‑1.5g/L； 优选地， 步骤(1)中， 所述高密度培 养基需在1 10‑120℃下灭菌15 ‑25min。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114891685 A 26.根据权利要求3 ‑5中任一项所述的提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物的制备方法， 其 特征在于， 步骤(1)中， 所述 二级种子液在高密度培 养基中的接种量 为1‑5vol％； 优选地， 步骤(1)中， 所述高密度发酵在搅拌下进行， 所述搅拌的转速为50 ‑100rpm， 发 酵的温度为3 0‑40℃， 发酵的压力为0.01 ‑0.05MPa， 发酵的时间为6 ‑16h； 优选地， 步骤(1)中， 所述高密度发酵的过程中 需控制发酵 液的pH为5 ‑6。 7.根据权利要求3 ‑6中任一项所述的提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物的制备方法， 其 特征在于， 步骤(2)中， 所述离心的温度为3 ‑5℃， 离心的转速为6000 ‑8000rpm， 离心的时间 为12‑20min。 8.根据权利要求3 ‑7中任一项所述的提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物的制备方法， 其 特征在于， 步骤(2)中， 所述菌泥和保护剂的质量比为1:(1 ‑2)； 优选地， 步骤(2)中， 所述保护剂包括海藻糖、 甘油、 甘露醇或吐温 ‑80中的任意一种或 至少两种的组合； 优选地， 步骤(2)中， 所述保护剂按质量百分含量计由如下组分组成： 海藻糖10 ‑15％、 甘油1‑2％、 甘露醇0.02 ‑0.1％、 吐温 ‑80 0.02‑0.1％， 余 量为水； 优选地， 步骤(2)中， 所述冷冻干燥的温度 ‑45～‑42℃， 冷冻干燥的时间为20～ 28h。 9.根据权利要求3 ‑8中任一项所述的提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物的制备方法， 其 特征在于， 步骤(2)后还需进 行步骤(3)： 将提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物粉碎后， 低温储 藏； 优选地， 所述粉碎后得到的菌粉粒径为6 0‑100目； 优选地， 所述低温储藏的温度为 ‑35～‑10℃。 10.一种根据权利要求1或2所述的提高嗜酸乳杆菌抗逆性的组合物在制备医药、 食品 或饲料中的用途。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114891685 A 3