(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210641728.7 (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 余昭军 地址 412000 湖南省株洲市荷塘区华 南路 中南无线电厂 (72)发明人 余昭军　 (74)专利代理 机构 上海未可期专利代理事务所 (普通合伙) 31360 专利代理师 余佳 (51)Int.Cl. A61K 36/064(2006.01) A61K 36/634(2006.01) A61K 35/742(2015.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/16(2006.01)A61P 37/04(2006.01) A61P 9/12(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 3/06(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 31/00(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/645(2006.01) C12R 1/07(2006.01) A61K 31/7048(2006.01) A61K 31/715(2006.01) A61K 33/04(2006.01) (54)发明名称 一种提高免疫力的益生菌组合物及其制备 方法 (57)摘要 本发明提出了一种提高免疫力的益生菌组 合物及其制备方法， 属于益生菌技术领域， 将枯 草芽孢杆菌接种到熟黄豆发酵后， 与党参和连翘 的水提取物、 黄芪甲苷、 山药多糖一同加入培养 基中， 进一步接种凝结芽孢杆菌TQ33和富硒酵 母， 发酵培养， 依次加入维生素、 氨基酸后， 进一 步发酵培养， 得到提高免疫力的益生菌组合物。 本发明制得的提高免疫力的益生菌组合物具有 良好的调节菌群的效果， 促进人体益生菌的生长 繁殖， 能刺激体内免疫调节， 提高机体免疫力， 调 节血糖、 血脂、 血压， 预防粥样动脉硬化及糖尿病 等， 减少炎症和感 染， 促进人体健康。 权利要求书2页 说明书12页 CN 114984065 A 2022.09.02 CN 114984065 A 1.一种提高免疫力的益生菌组合物的制备方法， 其特征在于， 将枯草芽孢杆菌接种到 熟黄豆发酵后， 与党参和连翘的水提取物、 黄芪甲苷、 山药多糖一同加入培养基中， 进一步 接种凝结芽孢杆菌TQ33和富硒酵母， 发酵培养， 依次加入维生素、 氨基酸后， 进一步发酵培 养， 得到提高免疫力的益 生菌组合物。 2.根据权利要求1所述的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1.菌种的活化： 将凝结芽孢杆菌TQ33、 枯草芽孢杆菌和富硒酵母分别接种到高氏培养 基中， 微氧 条件下培 养成菌种 种子液； S2.黄豆的处理： 将黄豆洗净、 煮熟后， 粉碎， 得到熟黄 豆粉； S3.黄豆的初步发酵处理： 将步骤S1中活化的枯草芽孢杆菌菌种种子液接种到步骤S2 中得到的熟黄 豆粉中， 微氧 条件下， 发酵培 养， 得到初步发酵处 理的黄豆； S4.中药的提取： 将党参、 连翘分别洗净后， 干燥， 粉碎， 加入水中微波沸腾提取， 过滤， 滤液浓缩干燥， 得到中药 水提取物； S5.液体培养基的制备： 将黄芪甲苷、 山药多糖、 碳源、 氮源和无机盐用无菌水溶解， 混 合均匀后， 用PBS溶 液调节培 养基pH值， 灭菌备用； S6.发酵： 将步骤S3中得到的初步发酵处理的黄豆、 步骤S4制得的中药水提取物加入步 骤S5中制得的液体培养基中， 接种步骤S1中活化的凝结芽孢杆菌TQ33和富硒酵母菌种种子 液， 微氧条件下， 发酵培 养， 得到发酵产物； S7.促发酵： 将维生素加入步骤S6中的发酵产物中， 微氧条件下， 发酵培养第一时间段 后， 加入氨基酸， 微氧 条件下， 发酵培 养第二时间段， 得到提高免疫力的益 生菌组合物。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述微氧条件为氧含量为5 ‑10％， 二 氧化碳含量为3‑7％， 余量为氮气， 其中， ％为体积百分比。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S 1中所述菌种种子液的含菌量为 107‑109cfu/mL； 步骤S3中所述枯草芽孢杆菌的接种量为5 ‑10％； 所述发酵培养温度为35 ‑39 ℃， 时间为12 ‑24h； 步骤S4中所述党参、 连翘的质量比为(5 ‑10)： 2； 所述微波沸腾提取次数 为2‑3次， 微波功率 为1000‑1500W， 每次提取时间为1 ‑2h。 5.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S5中所述黄芪甲苷、 山药多糖、 碳 源、 氮源、 无机盐和无菌水的质量比为(1 ‑2)： (3‑5)： (15‑25)： (7‑15)： (1‑3)： 1000； 所述碳 源选自糖蜜、 葡萄糖、 麦芽糖、 乳糖、 蔗糖、 果糖、 可溶性淀粉中的至少一种； 所述氮源选自氨 水、 尿素、 铵盐、 硝酸盐、 鱼粉中的至少一种； 所述无机盐选自氯化钠、 氯化钾、 氯化钙、 氯化 镁、 硫酸镁、 氯化亚铁、 硫酸亚铁、 氯化铁、 硫酸锌、 硫酸铜、 硫酸锰、 氯化锌、 氯化铜、 氯化锰 中的至少一种； 所述PBS溶 液调节培 养基pH值至 6.8‑7.2。 6.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S6中所述初步发酵处理的黄豆、 中药水提取物、 液体培养基的质量比为(5 ‑12)： (2‑5)： 20； 所述凝结芽孢杆菌TQ33的接种量 为2‑5％； 所述富硒酵母的接种量为4 ‑7％； 所述发酵培养条件为35 ‑38℃， 培养24 ‑36h； 步骤 S7中所述发酵培 养条件为3 5‑38℃， 所述第一时间段为8 ‑12h， 所述第二时间段为24 ‑48h。 7.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述维生素选自维生素C、 维生素B1、 维生素B2、 维生素B6、 维生素B12、 维生素A、 维生素 K、 维生素D、 维生素E中的至少一种。 8.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述氨基酸选自甘氨酸、 丝氨酸、 苏氨 酸、 缬氨酸、 色氨酸、 亮氨酸、 丙氨酸、 半胱氨酸、 甲硫氨酸、 赖氨酸、 异亮氨酸、 苯氨酸、 牛磺权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114984065 A 2酸中的至少一种。 9.根据权利要求2所述的制备 方法， 其特 征在于， 具体包括以下步骤： S1.菌种的活化： 将凝结芽孢杆菌TQ33、 枯草芽孢杆菌和富硒酵母分别接种到高氏培养 基中， 微氧 条件下培 养成菌种 种子液， 含菌量 为107‑109cfu/mL； S2.黄豆的处理： 将黄豆洗净、 煮熟后， 粉碎， 得到熟黄 豆粉； S3.黄豆的初步发酵处理： 将步骤S1中活化的枯草芽孢杆菌菌种种子液接种到步骤S2 中得到的熟黄豆粉中， 枯草芽孢杆菌的接种量为5 ‑10％， 微氧条件下， 35 ‑39℃发酵培养12 ‑ 24h， 得到初步发酵处 理的黄豆； S4.中药的提取： 将5 ‑10重量份党参、 2重量份连翘分别洗净后， 干燥， 粉碎， 加入50重量 份水中， 1000 ‑1500W微波沸腾提取2 ‑3次， 每次提取时间为1 ‑2h， 过滤， 滤液浓缩干燥， 得到 中药水提取物； S5.液体培养基的制备： 将1 ‑2重量份黄芪甲苷、 3 ‑5重量份山药多糖、 15 ‑25重量份碳 源、 7‑15重量份氮源、 1 ‑3重量份无机盐用1000重量份无菌水溶解， 混合均匀后， 用PBS溶液 调节培养基pH值至 6.8‑7.2， 紫外线灭菌备用； S6.发酵： 将5 ‑12重量份步骤S3中得到 的初步发酵处理的黄豆、 2 ‑5重量份步骤S4制 得 的中药水提取物加入20重量份步骤S 5中制得的液体培养基中， 接种步骤S1 中活化的凝结芽 孢杆菌TQ33和富硒酵母菌种种子液， 凝结芽孢杆菌TQ33的接种量为2 ‑5％； 富硒酵母的接种 量为4‑7％， 微氧 条件下， 3 5‑38℃发酵培 养24‑36h， 得到发酵产物； S7.促发酵： 将0.5 ‑1重量份维生素加入步骤S6中的100重量份发酵产物中， 微氧条件 下， 35‑38℃发酵培养8 ‑12h， 再加入1 ‑2重量份氨基酸， 微氧条件下， 35 ‑38℃发酵培养24 ‑ 48h， 得到提高免疫力的益 生菌组合物； 以上， 微氧条件为氧含量为5 ‑10％， 二氧化碳含量为3 ‑7％， 余量为氮气， 其中， ％为体 积百分比。 10.一种如权利要求1 ‑9任一项所述的制备 方法制得的提高免疫力的益 生菌组合物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114984065 A 3