(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210675543.8 (22)申请日 2022.06.15 (66)本国优先权数据 202210631121.0 202 2.06.06 CN (71)申请人 南京黄教授食品科技有限公司 地址 211225 江苏省南京市溧水区白马镇 食品园大道1 1-3号 (72)发明人 黄明　黄继超　黄天然　宋萌萌　 (74)专利代理 机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 专利代理师 傅婷婷　徐冬涛 (51)Int.Cl. A23B 4/20(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 3/00(2006.01)C12R 1/145(2006.01) (54)发明名称 一种抑制双酶梭菌 芽孢萌发的方法 (57)摘要 本发明公开了一种抑制双酶梭菌芽孢萌发 的方法。 一种抑制双酶梭菌芽孢萌发的方法， 使 用含天然植物提取物的试剂处理双酶梭菌抑制 芽孢萌发。 本发明通过从桑叶、 芦荟或甘草中提 取活性物质处理萌发剂存在下的双酶梭菌芽孢， 为抑制双酶梭菌芽孢萌发， 控制肉品中的双酶梭 菌污染提供理论基础。 权利要求书2页 说明书7页 附图6页 CN 115005264 A 2022.09.06 CN 115005264 A 1.一种抑制双酶梭菌芽孢萌发的方法， 其特征在于使用以下任意一种 含天然植物提取 物的试剂处 理双酶梭菌抑制芽孢萌发： (1)桑叶提取物： 通过把干桑叶粉碎， 用70 ‑75％乙醇溶解后在40 ‑50℃超声提取0.5 ‑ 2h， 提取2 ‑5次， 旋转蒸发去除乙醇 并冻干而获得； 优选取桑叶粉碎， 按1:10体积加入 75％乙 醇， 40℃超声提取1h， 提取3次， 旋转蒸发去除 乙醇并冻干而获得； (2)芦荟提取物： 通过把干芦荟粉碎， 用70 ‑75％乙醇溶解后在40 ‑50℃超声提取0.5 ‑ 2h， 提取2 ‑5次， 旋转蒸发去除乙醇并冻干而获得； 优选通过把干芦 荟粉碎， 按1:10体积加入 75％乙醇， 溶解后在45℃超声提取1h， 提取3次， 旋转蒸发去除 乙醇并冻干而获得； (3)甘草提取物是通过把甘草粉碎， 用70 ‑75％乙醇溶解后在40 ‑50℃超声提取0.5 ‑2h， 提取2‑5次， 旋转蒸发去除乙醇并冻干而获得； 优选通过把干甘草粉碎， 按1:10体积加入 75％乙醇， 溶解后在45℃超声提取1h， 提取3次， 旋转蒸发去除 乙醇并冻干而获得。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于所述的含天然植物提取物的试剂中还包括 芽孢萌发剂。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于所述的芽孢萌发剂选自以下一种或几种的 组合： D‑葡萄糖、 D ‑果糖、 D‑半乳糖、 D ‑木糖、 L‑丙氨酸、 L ‑天冬氨酸、 L ‑缬氨酸、 L‑脯氨酸、 L ‑ 组氨酸、 L ‑亮氨酸、 肌苷、 D PA； 所述的萌发剂优选自L ‑丙氨酸和肌苷的组合或者D PA。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于所述的含天然植物提取物的试剂为含有L ‑ 丙氨酸120 ‑180mmol/L+肌苷15 ‑30mmol/L+天然植物提取物的25mM、 pH＝7.4的Tris ‑HCl缓 冲液； 其中当天然植物提取物为桑叶提取物时， 浓度为50 ‑100mg/mL； 当天然植物提取物为 芦荟提取物时， 浓度为25 ‑100mg/mL； 当天然植物提取物为甘草 提取物时， 浓度为3 ‑7mg/mL。 5.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于所述的含天然植物提取物的试剂为含有DPA   6‑10mmol/L+天然植物提取物的25mM、 pH＝7.4的Tris ‑HCl缓冲液； 其中当天然植物提取物 为桑叶提取物时， 浓度为100mg/mL； 当天然植物提取物为芦荟提取物时， 浓度为25 ‑100mg/ mL， 优选25 ‑50mg/mL； 当天然植物提取物为甘草提取物时， 浓度为1.5 ‑25mg/mL， 优选1.5 ‑ 7mg/mL。 6.根据权利要求1 ‑5中任一项所述的方法， 其特征在于包括将所述的含天然植物提取 物的试剂与双酶梭菌芽孢悬液或含双酶梭菌芽孢的物质混合， 涡旋均匀， 放入37℃厌氧培 养箱中培 养。 7.用于抑制双酶梭菌芽孢萌发的天然植物提取物， 其特征在于通过把桑叶粉、 芦荟粉 或甘草粉用70 ‑75％乙醇溶解后在40 ‑50℃超声提取0.5 ‑2h， 提取2 ‑5次， 旋转蒸发去除乙醇 并冻干而获得。 8.一种含权利要求7所述的天然植物提取物的试剂， 其特征在于所述的试剂为含有芽 孢萌发剂和权利要求7 所述的天然植物提取物的Tris ‑HCl缓冲液。 9.根据权利要求8所述的试剂， 其特征在于所述的含天然植物提取物的试剂为含有L ‑ 丙氨酸120 ‑180mmol/L+肌苷15 ‑30mmol/L+天然植物提取物的25mM、 pH＝7.4的Tris ‑HCl缓 冲液； 其中当天然植物提取物为桑叶提取物时， 浓度为50 ‑100mg/mL； 当天然植物提取物为 芦荟提取物时， 浓度为25 ‑100mg/mL； 当天然植物提取物为甘草 提取物时， 浓度为3 ‑7mg/mL； 或者所述的含天然植物提取物的试剂为含有DPA  6‑10mmol/L+天然植物提取物的 25mM、 pH＝7.4的Tris ‑HCl缓冲液； 其中当天然植物提取物为桑叶提取物时， 浓度为100mg/权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115005264 A 2mL； 当天然植物提取物为芦荟提取物时， 浓度为25 ‑100mg/mL， 优选25 ‑50mg/mL； 当天然植物 提取物为甘草 提取物时， 浓度为1.5 ‑25mg/mL， 优选1.5 ‑7mg/mL。 10.权利要求7所述的天然植物提取物、 权利要求8 或9所述的试剂在抑制双酶梭菌芽孢 萌发中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115005264 A 3