(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210646858.X (22)申请日 2022.06.08 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.22064 2021.0 3.23 (71)申请人 河北农业大 学 地址 071000 河北省保定市莲池区灵雨寺 街289号 (72)发明人 郭云霞　郝庆红　郭晓军　刘泽　 段春辉　郭兴哲　刘月琴　张英杰　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 孙光远 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)C05F 17/20(2020.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种快速促进纯羊粪腐熟的发酵菌剂及其 应用 (57)摘要 本发明公开了一种快速促进纯羊粪腐熟的 发酵菌剂及其应用。 属于微生物菌剂技术领域。 提供了一种枯草芽孢杆菌B ‑1， 其特征在于， 保藏 编号为CGMCCNo.22064， 以及包括上述菌株 的菌 剂、 菌肥、 制备和发酵方法。 本发明提供的纯羊粪 腐熟用菌剂， 产纤维素酶活力138.78U/mL， 蛋白 酶活力197.21U/mL。 可在高温阶段快速降解羊粪 中的纤维素类物质， 产生小分子有机质， 促进发 酵过程中有机质和总养分含量增加， 同时发酵过 程中菌株耗氧产热， 明显缩短二次羊粪发酵时 间， 可使寄生虫卵死亡率达到100％和粪大肠杆 菌数量＜10 个/g， 提高有机肥品质。 权利要求书1页 说明书5页 CN 114891691 A 2022.08.12 CN 114891691 A 1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)B ‑1， 其特征在于， 保藏编号为CGMCC   No.22064。 2.一种包括权利要求1所述的枯 草芽孢杆菌B ‑1的菌剂。 3.一种包括权利要求1所述的枯 草芽孢杆菌B ‑1或权利要求2所述菌剂的菌肥。 4.一种羊粪的发酵方法， 其特征在于， 使用权利要求1所述枯草芽孢杆菌B ‑1， 保藏编号 为CGMCC No.22064， 或使用权利要求2所述菌剂， 或使用权利要求3所述菌肥。 5.权利要求2所述菌剂的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)摇瓶发酵： 培 养基接入权利要求1所述 枯草芽孢杆菌B ‑1， 培养， 得发酵 液A； (2)种子培养： 发酵液A接入培 养基， 发酵， 得发酵 液B； (3)二次发酵： 发酵 液B接入培 养基， 发酵， 离心浓 缩、 喷雾干燥， 得菌剂。 6.如权利要求5所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中接种量占接种后总体积5～ 10％； 培养条件： pH值7.5， 培 养时间45～5 5h； 步骤(2)中接种量占接种后总体积5～10％； 发酵条件： 种龄12～14h， 发酵温度35～38 ℃， 转速300r/min， 通气量0.2 ～0.8VVM， 发酵周期34～3 6h； 步骤(3)中接种量占接种后总体积5～10％； 发酵条件： 通风量1： 0.8， 发酵温度35～38 ℃， 转速250～300r/min， 发酵周期34～36h； 所述离心： 离心转速6900r/mim， 流量1～1.5T/ h， 压力3kg/cm2； 喷雾干燥： 进风口温度170～180℃， 尾风口温度120～130℃， 进料速度30～ 50kg/h； 所述步骤(1)～(3)中培养基 成分： 按质量份数计， 玉米粉1份、 葡萄糖1.7份、 MnSO4·H2O  0.4份、 MgSO4为0.02份、 无菌水90.8 8份。 7.如权利要求 4所述的发酵 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)将权利要求6制备的菌剂稀释接入羊粪中； (2)将混合 好的羊粪， 构建小堆羊粪， 控制堆体温度； (3)将小堆羊粪作为菌种转入大堆羊粪， 进行二次羊粪的发酵。 8.如权利要求7所述的发酵方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述稀释至1.0 ×1010CFU/g； 接种量占接种后总体积0.0 5％； 步骤(2)所述小堆羊粪规格： 长 ×宽×高为5m×2m×1.5m； 所述堆体温度控制在45～60 ℃； 步骤(3)所述大堆羊粪规格： 长 ×宽×高为15m×8m×3m； 所述二次羊粪的发酵时间共 15～20天。 9.权利要求1所述枯草芽孢杆菌B ‑1、 权利要求2所述菌剂、 权利 要求3所述菌肥在农业、 工业生产中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891691 A 2一种快速促进 纯羊粪腐熟的发酵菌剂及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 微生物菌剂技术领域， 更具体的说是涉及一种快速促进纯羊粪腐熟的 发酵菌剂及其应用。 背景技术 [0002]羊属于草食动 物， 其粪便中含有大量有机质及N、 P、 K等元素， 是制作 有机肥的绝佳 原料。 但羊粪中含有的大量纤维素和半 纤维素类物质是制约其腐熟进程及有机肥品质的瓶 颈。 [0003]目前， 传统羊粪发酵主要混以秸秆、 稻草等农业废弃物按一定比例， 接种菌剂或自 然发酵， 导致 发酵腐熟周期 长， 高温维持时间短造成寄生虫卵杀灭不彻底， 纤维素降解不彻 底使得物料 肥效降低等问题。 [0004]微生物固态发酵技术是利用功能菌剂产生的纤维素酶破坏羊粪中纤维素类结构， 将其快速转化为植物根系易吸收的养分， 同时产生阶段性持续高温可彻底杀灭物料中虫 卵、 致病菌、 杂草种子等， 解决目前纯羊粪发酵过程中堆肥周期长、 寄生虫卵杀灭不彻底及 纤维素降解 率低， 最终导 致肥效下降的问题。 [0005]目前存在市售微生物堆肥促腐熟菌剂， 由于羊粪发酵多混以含纤维素高的秸秆、 稻草等农业废弃物以调整含 水率， 当用于羊粪堆肥发酵时往往存在发酵周期 长、 腐熟度低、 纤维类物质降解 不彻底， 使得羊粪腐熟发酵 肥效下降。 [0006]因此， 如何提供一种快速促进纯羊粪腐熟的发酵菌剂及 其应用是本领域技术人员 亟需解决的问题。 发明内容 [0007]有鉴于此， 本发明提供了一种快速促进纯羊粪腐熟的发酵菌剂及其应用。 羊粪腐 熟发酵菌剂直接影响发酵周期、 有机质的转化率及肥效的高低。 本发明提供 的菌剂包括纯 羊粪发酵用稳定高产木质纤维素酶和蛋白酶的枯草芽孢杆菌， 结合对纯羊粪发酵菌剂发酵 过程控制， 缩短羊粪腐熟周期， 提高有机质转 化率。 [0008]保藏信息： 枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)B ‑1， 于2021年03月23日保藏在中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)， 保藏地址为北京市朝 阳区北辰西 路1号院3号， 保藏 号为CGMCC NO.22064。 [0009]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0010]一种枯草芽孢杆菌(Baci llus subtilis)B‑1， 保藏编号 为CGMCC No.22064。 [0011]本发明还提供了一种包括上述的枯 草芽孢杆菌B ‑1的菌剂。 [0012]本发明还提供了一种包括上述的枯 草芽孢杆菌B ‑1或上述菌剂的菌肥。 [0013]本发明还提供了一种羊粪的发酵方法， 使用上述枯草芽孢杆菌B ‑1， 保藏编号为 CGMCC No.22064， 或使用上述菌剂， 或使用上述菌肥。 [0014]本发明还提供了上述菌剂的制备 方法， 包括以下步骤：说　明　书 1/5 页 3 CN 114891691 A 3