(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210732087.6 (22)申请日 2022.06.26 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M2014672 2014.12.28 CCTCC NO:M2016 005 2016.01.04 CCTCC NO:M2019831 2019.10.17 (71)申请人 江西科技师 范大学 地址 330038 江西省南昌市红谷滩新区红 角洲学府大道589号 (72)发明人 商紫钦　肖依文　朱笃　张志斌　 汪涯　高波良　吴文婷　罗健　 (74)专利代理 机构 南昌华成联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 36126 专利代理师 张建新(51)Int.Cl. C05F 17/20(2020.01) C05G 3/00(2020.01) C05G 3/60(2020.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/14(2006.01) C12R 1/645(2006.01) C12R 1/80(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种微生物菌肥的制备方法 (57)摘要 本发明涉及一种微生物发酵菌肥的制备方 法， 本发明提供了一种利用球毛壳菌、 解淀芽孢 杆菌 （BNCC223006） 、 爪哇正青霉、 唐菖蒲伯克霍 尔德菌， 按照一定的比例进行复配， 利用农作物 秸秆或者酒糟为底物发酵制成， 该微生物菌肥具 有抗植物病原真菌、 杀根结线虫、 降解重金属和 富集有益元素的功能。 本发明将上述4种微生物 菌体按照体积比1:1:1:1进行混合， 并在此基础 上通过微生物真菌降解农作物秸秆或酒糟等廉 价生物质发酵制成 复合微生物肥料。 本发明的微 生物菌肥不仅可以使菌体在土壤中存活， 可以分 解有机物质形成腐殖质， 并释放出养分， 为植物 提供营养， 还能够分泌出具有提高植物抗胁迫能 力的次级代谢产物。 权利要求书2页 说明书5页 附图2页 CN 115160035 A 2022.10.11 CN 115160035 A 1.一种微 生物菌肥的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： （1） 使用接种环挑取2 ‑3环球毛壳菌DX ‑THS3置于种子培养基上进行振荡培养， 得球毛 壳菌DX‑THS3种子悬浮液； 使用接种环挑取2 ‑3环爪哇正青霉R57置于种子培养基上进行振 荡培养， 得爪 哇正青霉R57种子悬浮液； 用接种环挑取2 ‑3环解淀粉芽孢杆菌置于营养肉汤 培养基上进行振荡培养， 得解淀粉芽孢杆菌种子悬浮液； 使用接种环挑取唐菖蒲伯克霍尔 德菌Fse32置 于种子培养基上进行培 养， 得唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse32种子悬浮液； （2） 将上述4种种子悬浮液按照体积比1:1:1:1进行混合， 置于发酵培养基上进行发酵 培养， 得发酵的二级种子液， 所述 发酵培养基的氮源包括酵母粉、 牛肉膏、 蛋白胨、 豆粕和玉 米浆粉中的一种； 所述发酵培 养基中氮源的浓度为2.0~9.0 g/L； （3） 将上述所得发酵的二级种子液按照8 ‑12% v/v体积比进行放大发酵培养， 所述放大 发酵培养基的碳源包括水稻秸秆粉、 小麦秸秆粉、 玉米秸秆粉、 酒糟中的一种； 放大发酵培 养， 获得复合 微生物发酵菌肥。 2.根据权利要求1所述的一种微生物菌肥的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中所述种 子培养基， 以水为溶剂， 包括以下浓度的组分： 马铃薯180~220 g/L， 葡萄糖18.0~22.0 g/L 和酵母膏0.1~0.3 g/L； 营养肉汁培养基的组分为： 牛肉膏  3.0 g/L， 蛋白胨  10.0 g/L， NaCl 5.0 g/L， 5.0mg/L  MnSO4·H2O， pH 7.0， 121 ℃， 15 min灭菌。 3.根据权利要求1所述的一种微生物菌肥的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中所述球 毛壳菌DX ‑THS3、 爪哇正青霉R57为实验室前期从东乡野生稻中分离筛选获得的内生真菌， 唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse32为实验室前期从东乡野生稻中分离筛选获得的内生细菌， 并将 其保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏号分别： CCTCC  NO: M 2016005， CCTCC  NO: M  2019831， CCTCC  NO: M 2014672； 所述解淀粉芽孢杆菌为商业化菌株购置于北纳生物， 编 号： BNCC 223006； 所述振荡培养的频率为120~180 rpm， 所述振荡培养的温度为25~30 ℃， 所述振荡培 养的时间为2~4 d。 4.根据权利要求1所述的一种微生物菌肥的制备方法， 其特征在于， 步骤 （2） 中所述发 酵培养基以水为溶剂， 包括以下浓度的组分： 蔗糖4.0~6.0 g/L， KH2PO4 3.0~4.0 g/L， 氮源 2.0~9.0 g/L， NaCl  0.4~0.6 g/L， MgSO4·7H2O 0.4~0.6 g/L， ZnSO4·7H2O 0.002~0.003  g/L， NaMoO4·2H2O 0.0002~0.0003 g/L， MnSO4·H2O 0.001~0.003 g/L， CaCl2 0.01~0.02  g/L和H3BO3 0.00002~0.00004 g/L。 5.根据权利要求1所述的一种微生物菌肥的制备方法， 其特征在于， 步骤 （2） 中所述发 酵培养的接种量 为2~4%； 所述发酵培 养的温度为25~30 ℃； 所述发酵培 养的时间为6~10 d； 所述发酵培 养为振荡培 养， 所述振荡的频率 为120~180 rpm。 6.根据权利要求1所述的一种微生物菌肥的制备方法， 其特征在于， 步骤 （3） 中所述放 大发酵培养的每2.5  L培养基包 括蔗糖12.0~13.0 g， KH2PO4 6.0~10.0 g， 蛋白胨17.0~18.0  g， NaCl 1.0~2.0 g， MgSO4·7H2O 1.0~2.0 g， ZnSO4·7H2O 0.007~0.008 g， NaMoO4·2H2O  0.0005~0.0007 g， MnSO4·H2O 0.004~0.006 g， CaCl2 0.03~0.04 g， H3BO3 0.00007~ 0.00008 g。 7.根据权利要求1所述的一种微生物菌肥的制备方法， 其特征在于， 步骤 （3） 中所述放权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115160035 A 2大发酵培养过程中还包括搅拌的步骤， 所述搅拌的频率为 180~220 rpm， 所述搅拌的曝气量 为0.5~1.5 vvm。 8.根据权利要求1所述的一种微生物菌肥的制备方法， 其特征在于， 步骤 （3） 中所述放 大发酵培 养的温度为25~30 ℃， 所述放大发酵培 养的时间为10~14 d。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115160035 A 3