(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210903343.3 (22)申请日 2022.07.26 (71)申请人 长春科技学院 地址 130000 吉林省长 春市双阳区东 华街 1699号 (72)发明人 关晴　李春义　 (74)专利代理 机构 成都时誉知识产权代理事务 所(普通合伙) 5125 0 专利代理师 汪林 (51)Int.Cl. A01K 67/02(2006.01) A61D 7/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/19(2006.01) C12R 1/445(2006.01) (54)发明名称 一种建立实验 小鼠乳腺炎模型的方法 (57)摘要 本发明公开了一种建立实验小鼠乳腺炎模 型的方法， 包括以下步骤： 大肠杆菌菌液和金黄 色葡萄球菌菌液的制备； 选择性成熟期的小鼠； 向所述小鼠的腹腔注射麻醉剂， 并用酒精棉球擦 拭小鼠乳腺及乳腺周围的皮肤； 利用手术镊将所 述小鼠的第四对乳头夹起， 并利用手术剪将乳尖 剪去， 剪除的部位长1mm； 利用平 头微量注射器吸 取菌液20μL， 将所述平头微量注射器延伸至所 述第四对乳头的乳导管中， 延伸深度为4 ‑5mm， 所 述平头微量注 射器垂直进入所述乳导管中， 缓慢 将菌液注入乳腺中， 然后缓慢旋转所述平头微量 注射器离开乳导管； 对所述小鼠进行眼球采血后 处死， 制备病理切片； 本发明有效提高乳腺炎模 型的成功构建概 率， 使得成模率搞到95％。 权利要求书2页 说明书5页 附图3页 CN 115211405 A 2022.10.21 CN 115211405 A 1.一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 实验菌液的制备 所述菌液包括大肠杆菌 菌液和金黄色葡萄球菌 菌液； 将大肠杆菌母液稀释， 得到大肠杆菌 菌液， 所述大肠杆菌 菌液的浓度为0.2mg/ml； 将金黄色葡萄球菌菌株进行摇床培养， 当金黄色葡萄球菌扩增至对数期， 其后重悬至2 ×108CFU/mL， 得到金黄色葡萄球菌 菌液； S2、 选择小鼠 选择性成熟期 8‑10周的小鼠， 所述小鼠中母鼠： 公鼠的比例为2:1； S3、 实验小鼠的处 理 麻醉小鼠： 向所述小鼠的腹腔注射麻醉剂， 待所述小鼠完全麻醉后， 正面朝上仰卧保定小鼠， 进行 脱毛， 将小鼠乳头暴露， 并用酒精棉球擦拭小鼠乳腺及乳腺周围的皮肤， 充分消毒， 保持乳 腺及乳腺周围皮肤的清洁干净； 乳腺处理： 利用手术镊将所述小鼠的第四对乳头夹起， 并利用手术剪将乳尖剪去， 剪除 的部位长1m m； 注射菌液： 利用平头微量注射器吸取0.2mg/mL的LPS  50 μL或2×108CFU/mL的金黄色葡萄球菌液20 μL， 将所述平头微量注射器延伸至所述第四对乳头的乳导管中， 延伸 深度为4‑5mm， 所述平 头微量注射器垂直进入所述乳导管中， 缓慢将所述平头微量注射器中的菌液注入乳腺中， 然后缓慢旋转所述平头微 量注射器离开乳导管； S4、 一段时间后， 对所述小鼠进行眼球采血后处死， 制备病理切片。 2.根据权利要求1所述的一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法， 其特征在于： 步骤S2中 所述小鼠均在哺乳期第七天， 所述小鼠与仔鼠至少隔离1h， 停止哺乳并禁食。 3.根据权利要求2所述的一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法， 其特征在于： 所述小鼠 为BALB/c小鼠、 昆明小鼠、 C 57小鼠任意几种。 4.根据权利要求1所述的一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法， 其特征在于： 步骤S3 中 所述麻醉剂为10％的水合氯醛， 所述水合氯醛的注射 量为0.1mL。 5.根据权利要求1所述的一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法， 其特征在于， 步骤S4 中， 所述病理切片的制备 方法为： 沿所述小鼠下腹的腹中线切开皮肤， 向两侧拨开分离， 将第四对乳腺暴露出， 将所述第 四对乳腺剥离下来， 一侧的乳腺放入4％的多聚甲醛溶液中， 制作病理切片， 剩余乳腺组织 放入4℃冰箱短期保存或﹣80℃冰箱冻存， 用于后期实验。 6.根据权利要求1所述的一种建立实验小鼠乳腺炎模型的方法， 其特征在于： 实验菌液 的具体制备步骤如下： 将1mg/mL的大肠杆菌055： B5母液通过PBS 溶液进行稀释， 稀释至0.2 mg/mL浓度， 即为大 肠杆菌菌液； 将所述金黄色葡萄球菌ATCC  35556菌株接种至肉汤培养基中， 在37℃、 pH为7.4的摇床 环境下进 行扩增培养， 当所述金黄 色葡萄球菌扩增至对数期后， 使用高压灭菌后的PBS溶液 进行重悬， 重悬至所述金黄色葡萄球菌的浓度为2 ×108CFU/mL， 其后置于4℃下进行保存，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115211405 A 2即为金黄色葡萄球菌 菌液。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115211405 A 3