(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210616743.6 (22)申请日 2022.06.01 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M202 2425 202 2.04.19 (71)申请人 聚慧食品科技 （重庆） 有限公司 地址 400711 重庆市北碚区悦复大道18号2 幢1单元1-1 (72)发明人 王斌　苟中军　邹滢　杜江　黄巧　 杨光　肖琳　 (74)专利代理 机构 重庆智慧之源知识产权代理 事务所(普通 合伙) 50234 专利代理师 高彬 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A23L 27/60(2016.01)A23L 19/10(2016.01) A23L 29/00(2016.01) A23L 2/38(2021.01) A23L 33/00(2016.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种希腊魏斯氏菌、 筛 选方法及其应用 (57)摘要 本发明提供一种希腊魏斯氏菌、 筛选方法及 其 应 用 ， 希 腊 魏 斯氏 菌 为 希 腊 魏 斯氏 菌 (Weissella  hellenicai  L‑1)菌株， 从腌制泡菜 中筛选得到， 本发明希腊魏斯氏菌(Weissella   hellenicai  L‑1)菌株用于紫薯发酵产品和海带 发酵产品等蔬菜发酵产品的制备。 本发明提供的 希腊魏斯氏菌L ‑1可以高产乳酸， 而且最高可耐 受50g/L NaCl、 pH＝2的酸性环境， 本菌株可以有 效利用食物固有成分， 提升发酵产品中总酸含 量， 使产品有浓郁 的酸香韵且色泽巨佳， 满足消 费者对发酵食品的需求。 权利要求书1页 说明书8页 序列表3页 附图3页 CN 114921377 A 2022.08.19 CN 114921377 A 1.一种希腊魏斯氏菌， 其特征在于： 所述希腊魏斯氏菌为希腊魏斯氏菌(Weissella   hellenicai L‑1)， 保藏于中国典型培 养物保藏中心， 保藏 号为CCTCC M 2022425。 2.如权利要求1所述一种希腊魏斯氏菌， 其特征在于： 所述希腊魏斯氏菌(Weissella   hellenicai L‑1)的16S rDNA序列如SEQ  ID NO.3所示。 3.一种根据权利要求1或2所述希腊魏斯氏菌的筛 选方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 称取西南地区酸菜样品置入含无菌去离子水的试管中， 充分振荡后形成母悬浮液； 将所述母悬浮液制备成10‑1、 10‑2、 10‑3、 10‑4、 10‑5去离子水梯度 稀释液， 备用； 取各所述梯度 稀释液分别涂布于 MRS固体培 养基上， 3 5℃培养48h后， 分离纯化， 得到分离 菌株； S2、 将S1得到的分离 菌株接种至 MRS液体培 养基中， 3 5℃， 80rpm培 养18h， 得到种子液； S3、 将S2得到的种子液按照1％的接种量接种于MRS液体培养基中， 35℃， 80rpm培养 24h， 得到所述希腊魏斯氏菌(Weis sella hellenicai L‑1)菌株。 4.如权利要求3所述一种希腊魏斯氏菌的筛选方法， 其特征在于： 所述希腊魏斯氏菌 (Weissella hellenicai  L‑1)菌株可耐受50g/L  NaCl、 pH＝2的酸性环境， 从而可以有效定 殖于腌制的蔬菜中启动蔬菜发酵， 实现快速产酸， 提高产酸速率， 实现快速启动蔬菜发酵， 得到蔬菜发酵产品。 5.一种根据权利要求1 ‑4中任一项所述希腊魏斯氏菌(Weissella  hellenicai  L‑1)菌 株在蔬菜发酵产品中的应用。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于： 所述蔬菜发酵产品包括紫薯发酵产品和海带 发酵产品。 7.根据权利要求6所述一种以所述希腊魏斯氏菌(Weissella  hellenicai  L‑1)菌株为 发酵剂的紫薯发酵产品， 其特 征在于， 其制备 方法包括如下步骤： 将所述希腊魏斯氏菌L ‑1菌株进行活化， 得到活化菌种； 将生鲜紫薯洗净后与水按1:1 蒸煮后定容打浆， 装入灭菌的三角瓶中， 按体积质量比5％的接种量接种所述希腊魏斯氏菌 L‑1菌株活化菌种， 20～ 25℃静置发酵 7天后， 得到所述 紫薯发酵产品。 8.如权利要求7所述一种以所述希腊魏斯氏菌(Weissella  hellenicai  L‑1)菌株为发 酵剂的紫薯发酵产品， 其特征在于， 所述活化的过程为： 将希腊魏斯氏菌L ‑1菌株接种于MRS 固体培养基上35℃活化培养24h， 用牙签取菌体接种于含有100mL的MRS液体培养基的250mL 三角瓶中， 3 5℃恒温下， 80r/mi n摇床培养18h， 直至 菌液浓度达 到108CFU/mL。 9.根据权利要求6所述一种以所述希腊魏斯氏菌(Weissella  hellenicai  L‑1)菌株为 发酵剂的海带发酵产品， 其特 征在于， 其制备 方法包括如下步骤： 将所述希腊魏斯氏菌L ‑1菌株进行活化， 得到活化菌种； 将挑选后的海带与蔬菜洗净， 将海带与水以1:3比例打浆， 蔬菜与水以1:2比例打浆； 将打浆后的海带液与蔬菜液装入灭 菌的三角瓶中， 按体积质量比2％的接种量接种所述希腊魏斯氏菌L ‑1菌株活化菌种， 20～ 25℃静置发酵6天后， 得到所述海带发酵产品。 10.如权利要求9所述一种以所述希腊魏斯氏菌(Weissella  hellenicai  L‑1)菌株为 发酵剂的海带发酵产品， 其特征在于： 接种 前混合的打浆后的所述海带液与蔬菜液体积比 为1:3。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921377 A 2一种希腊魏斯氏菌、 筛选方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明属于微 生物技术领域， 具体涉及一种希腊魏斯氏菌、 筛 选方法及其应用。 背景技术 [0002]西南地区素有食用发酵食品的传统， 蕴含着丰富的益生菌资源， 但西南地区目前 益生菌资源家底不清， 挖掘与基础特性研究不足， 已经成为制约西南地区发酵食品产业发 展瓶颈。 发酵食品的风味是影响产品感官品质和消费者接受度的重要因素， 西南地区传统 泡菜的愉悦风味来自于异型乳酸菌发酵和同型乳酸菌发酵， 在发酵初期， 异型乳酸菌迅速 产生大量的乙酸、 乙醇、 甘露醇等风味物质， 随着发酵进行， 同型乳酸菌会取代异型乳酸菌 大量产酸， 使得最 终产品具有十 分酸爽的感觉， 两者协同发酵形成了其独特的风味。 将西南 地区传统泡菜中的发酵菌进行研究， 用于发酵食品中快速发酵， 对发酵食品中的风味特征、 耐受性等深入研究获得高品质产品具有广阔的应用前 景。 [0003]紫薯(Ipomoea  batatas L.)是一种可食用的根， 属于旋花科。 深颜色的紫薯是由 于存在以花青素或芍药苷为苷元的高度酰化的花青素， 这是一种对健康十 分有益的天然色 素。 据报道， 紫薯中大量的花青素和酚类物质具有抗氧化、 抗癌、 抗炎症和抗高血糖等生理 活性。 此外， 紫薯还含有18％的紫薯淀粉、 5％左右的糖、 2％左右蛋白质以及膳食纤维、 维生 素(C、 B1、 B2、 E)、 矿物质(钾、 钙、 镁、 锌)等营养成分， 碘和硒更是普通红薯的20倍以上。 所以 紫薯有着延年益寿食品的美称， 是一种绿色健康的食品原料。 但现有技术中， 紫薯在加工过 程中存在易变色、 易变味、 口感不佳等问题。 [0004]海带含有丰富的化学成分和生物活性物质， 已被用于食品、 饲料和药物前体等许 多工业领域。 研究表明， 海带中含有十分丰富的褐藻多糖， 褐藻多糖又分为褐藻胶、 褐藻淀 粉与褐藻糖胶3种物质， 其中褐藻胶占比为 15％～25％， 在功能性食品与部分药品的再加工 过程中的应用价值非常高。 此外海带还含有丰富的褐藻酸、 维生素、 矿物质和多种微量元 素， 并因含有游离的谷氨酸而 带有十分丰富的鲜味。 目前我国海带的培育技术已十 分成熟， 但海带加工利用却仍处于初级阶段， 产品主要是盐渍海带、 淡干海带和即食调味海带， 创新 性发展海带深加工产业、 研发健康营养的海带加工制品， 符合我国2030  健康中国战略需 求， 同时可增 加海带附加值， 促进海带产业链可持续发展。 发明内容 [0005]为了解决现有技术中的问题， 本 发明提供一种希腊魏斯氏菌、 筛选方法及其应用， 得到的希腊魏斯氏菌产酸快、 高产乳酸， 筛选得到的希腊魏斯氏菌在发酵食品中应用使得 发酵食品具有酸度柔和、 风味饱满、 色泽 好等特点。 [0006]本发明解决其 技术问题是采用以下技 术方案实现的： [0007]本发明第一个目的在于提供一种希腊魏斯氏菌， 其特征在于， 所述希腊魏斯氏菌 为希腊魏斯氏菌(Weissella  hellenicai  L‑1)， 保藏于中国典型培养物保藏中心， 地址为 中国湖北省武汉市武昌珞珈山， 保藏 号为CCTCC M 2022425， 保藏时间为202 2年4月19日。说　明　书 1/8 页 3 CN 114921377 A 3