(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210843868.2 (22)申请日 2022.07.18 (71)申请人 江西省科 学院生物资源研究所 地址 330096 江西省南昌市高新 技术开发 区昌东大道7 777号江西省科 学院 申请人 时代生物科技 （深圳） 有限公司 (72)发明人 翟振亚　刘建平　蔡力创　刘会平　 蒋亮　蒋泽根　 (74)专利代理 机构 北京鑫瑞森知识产权代理有 限公司 1 1961 专利代理师 王立普 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A61K 31/575(2006.01) A01K 67/027(2006.01)A61P 1/00(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/22(2006.01) (54)发明名称 一种小肠细胞凋亡模型的构建方法及其应 用 (57)摘要 本发明提供了一种小肠细胞凋亡模型的构 建方法及其应用， 属于生物医药制备领域。 本发 明提供了一种由牛磺鹅脱 氧胆酸、 肺炎克雷伯菌 和肠杆菌组成的菌液， 该菌液可成功诱导不依赖 于胆汁酸受体， 不诱导细胞死亡， 同时具有抗生 素耐药性和耐胆汁酸药性的小肠细胞凋亡模型 的形成， 可有效应用于肠道健康药物的筛选当 中， 并且成功筛选出一种以猪胆酸为核心， 以乙 酸钠、 丁酸钠和大豆卵磷脂为辅助剂/增 效剂的 药物， 实验证明使用该药物可显著降低肠道细胞 凋亡相关基因的表达和增加肠道细胞增殖相关 基因的表达， 为相关肠道疾病的有效诊断和治疗 提供了理论和实 践支撑。 权利要求书1页 说明书9页 附图1页 CN 114990031 A 2022.09.02 CN 114990031 A 1.一种菌液， 其特 征在于， 所述菌液含有牛磺鹅脱氧胆酸、 肺炎克 雷伯菌和肠杆菌 。 2.如权利要求1所述的菌液， 其特 征在于， 所述牛磺鹅脱氧胆酸的浓度为10 0 μmol/L。 3.如权利要求2所述的菌液， 其特征在于， 所述肺炎克雷伯菌和肠杆菌的总浓度为1 × 109CFU/mL， 其中肺炎克 雷伯菌和肠杆菌浓度分别为5 ×108CFU/mL。 4.一种小肠细胞凋亡模型的构建方法， 其特征在于， 所述小肠细胞凋亡模型由权利要 求1～3任一所述的菌液诱 导形成。 5.如权利要求4所述的小肠细胞凋亡模型的构建方法， 其特征在于， 所述构建方法以15 周龄无菌小鼠为对象， 每日灌服所述菌液10 0 μL， 灌服12天。 6.权利要求1～3任一所述的菌液或权利要求4～5任一所述的小肠细胞凋亡模型在筛 选改善肠道健康药物中的应用。 7.一种改善肠道健康 的药物， 其特征在于， 所述药物为使用权利要求1～3任一所述的 菌液或权利要求4～5任一所述的小肠细胞凋亡模 型筛选的改善肠道健康的药物； 所述药物 以猪胆酸为核心， 以乙酸钠、 丁 酸钠和大豆卵磷脂为辅助剂/增效剂。 8.如权利要求7 所述的药物， 其特 征在于， 所述猪 胆酸的终浓度为 4g/L。 9.如权利要求8所述的药物， 其特征在于， 所述猪胆酸、 乙酸钠、 丁酸钠以及大豆卵磷脂 的配比为10:1:1:3 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114990031 A 2一种小肠细胞凋亡模型的构建 方法及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药制备领域， 尤其涉及 一种小肠细胞凋亡模型的构建方法及其 应用。 背景技术 [0002]胆汁酸是一类内源小分子代谢物， 是调控糖脂代谢、 肠道发育的关键小分子， 但酒 精性肝炎、 甲肝、 肠炎等疾病往往可能导致胆汁酸代谢障碍， 使 得胆汁酸在肠道中引起肠道 等器官和组织的损伤， 从而引起腹泻和肠炎等疾病。 目前对胆汁酸相关的研究往往集中于 次级胆汁酸如石胆酸(LCA)、 脱氧胆酸及其受体如FXR、 TGR5在免疫细胞或结肠细胞中增殖 和屏障调控活性， 对于胆汁酸肠道细胞毒性的研究也往往集中于相关受体引起的变化。 牛 磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)是存在于人和小鼠等哺乳动物血清和肠道中的主要胆汁酸之一， 但 是目前关于牛磺鹅脱 氧胆酸(TCDCA)的研究较少， 而且也未发现有可以不依赖于相关受体， 诱导肠道凋亡(而非通过引起细胞膜破裂坏死)， 从而进行药物筛选的模型， 这极大地限制 了胆汁酸活性的研究进 展。 [0003]在上述疾病中， 由于胆汁酸在肠道中的大量存在， 往往也会诱导部分肠道优势菌 群产生特定胆汁酸耐受抗性。 与此同时， 在治疗过程中抗生素的使用往往导致肠道菌群出 现抗生素耐受性， 从而影响患者的康复和康复后的生活质量。 但如何针对同时具有胆汁酸 和抗生素耐受性菌群引起的肠道细胞凋亡进 行研究和治疗， 目前也尚未发现有相应的模型 和药物应用方法。 [0004]此外， 目前猪胆酸被发现能调控肠道激素的分泌， 但其是否能通过改善细胞凋亡， 进而改善肠道健康也未有报道。 发明内容 [0005]为了解决上述技术问题， 本发明提供了一种小肠细胞凋亡模型的构建方法及 其应 用。 本发明提供了一种由牛磺鹅脱 氧胆酸、 肺炎克雷伯菌和肠杆菌组成的菌液， 该菌液可成 功诱导不依赖于胆汁酸受体， 不诱导细胞死亡， 同时具有抗生素耐药性和耐胆汁酸药性的 小肠细胞凋 亡模型的形成， 可有效应用于肠道健康药物的筛选当中， 并且成功筛选出一种 以猪胆酸为核心， 以乙酸钠、 丁酸钠和大豆卵磷脂为辅助剂/增效剂的药物， 实验证明使用 该药物可显著降低肠道细胞凋亡相关基因的表达和增加肠道细胞增殖相关基因的表达， 为 相关肠道疾病的有效诊断和治疗提供了理论和实 践支撑。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用了以下技 术方案： [0007]本发明提供了一种菌液， 所述菌液含有牛磺鹅脱氧胆酸、 肺炎克 雷伯菌和肠杆菌 。 [0008]优选的， 所述牛磺鹅脱氧胆酸的浓度为10 0 μmol/L。 [0009]优选的， 所述肺炎克雷伯菌和肠杆菌的总浓度为1 ×109CFU/mL， 其中肺炎克雷伯 菌和肠杆菌浓度分别为5 ×108CFU/mL。 [0010]本发明还提供了一种小肠细胞凋亡模型的构建方法， 所述小肠细胞凋亡模型由所说　明　书 1/9 页 3 CN 114990031 A 3