(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210966530.6 (22)申请日 2022.08.12 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M202 2232 2022.03.09 CCTCC NO： M202 2493 202 2.04.25 CCTCC NO： M202 2494 202 2.04.25 (71)申请人 安徽师范大学 地址 241000 安徽省芜湖市北京东路1号 安 徽师范大学生化楼309室 (72)发明人 洪培　疏义林　吴海龙　汪建中　 (74)专利代理 机构 北京精金石知识产权代理有 限公司 1 1470 专利代理师 陈伟 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)C02F 3/34(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/38(2006.01) (54)发明名称 一种好氧反硝化组合菌剂及其制备方法和 应用 (57)摘要 本发明提供了一种好氧反硝化组合菌剂及 其制备方法和应用， 属于废水处理技术领域。 本 发明提供了一种门多萨假单胞菌IHB602、 甲基杆 菌DC‑1和施氏假单胞菌IHB618， 所述的菌 可用于 废水处理， 显著提高废水中无机氮的去除效率， 共聚集能力强， 且其制备方法及应用工艺简单， 可显著降低能耗及成本， 对于废水处理具有重要 的意义。 权利要求书2页 说明书6页 附图4页 CN 115386517 A 2022.11.25 CN 115386517 A 1.一种门多萨假单胞菌IHB602， 其特征在于： 所述的门多萨假单胞菌IHB602于2022年4 月25日保藏于中 国典型培养物保藏中心， 其地址为湖北省武汉市武昌区八一路299 号， 武汉 大学， 保藏编号 为CCTCC No.M2022494。 2.一种甲基杆菌DC ‑1， 其特征在于： 所述的甲基杆菌DC ‑1于2022年3月9日保藏于中国 典型培养物保藏中心， 保藏单位地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号， 武汉大学， 保藏 编号为CCTCC No.M2022232。 3.一种施氏假单胞菌IHB618， 其特征在于： 所述的施氏假单胞菌IHB618于2022年4月25 日保藏于中 国典型培养物保藏中心， 保藏单位地址为湖北省武汉市武昌区八一路299 号， 武 汉大学， 保藏编号 为CCTCC No.M2022493。 4.权利要求1所述的门多萨假单胞菌IHB602、 权利要求2所述的甲基杆菌DC ‑1和/或权 利要求3所述的施氏假单 胞菌IHB618在制备废水处 理好氧反硝化组合菌剂中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于： 所述的门多萨假单胞菌IHB602、 甲基杆菌 DC‑1和施氏假单 胞菌IHB618的数量比为1:0.5 ‑2:0.5‑2， 优选为1:1:1。 6.一种好氧反硝化组合菌剂， 其特征在于： 所述的组合菌剂包括权利要求1所述的门多 萨假单胞菌IHB602、 权利要求2所述的甲基杆菌DC ‑1和/或权利要求3所述的施氏假单胞菌 IHB618。 7.根据权利要求6所述的组合菌剂， 其特征在于： 所述的门多萨假单胞菌IHB602、 甲基 杆菌DC‑1和施氏假单 胞菌IHB618的数量比为1:0.5 ‑2:0.5‑2， 优选为1:1:1。 8.一种好氧反硝化组合菌剂的制备 方法， 其特 征在于： 所述的方法包括以下步骤： (1)将菌株置于DTM培养基中生长， 定期取样， 测定OD600值， 并根据时间和OD600值的关系 绘制生长曲线图， 在对数后期生长阶段收获菌液， 离心， 去除上清液， 得到浓 缩菌株； (2)将浓缩菌株重悬于共聚集缓冲液中洗涤， 得到含有菌株的悬浮液A； (3)调节悬浮液A的吸光度值至OD600＝1， 得到悬浮液B； (4)按照步骤(1) ‑(3)的方法， 分别制得门多萨假单胞菌IHB602、 甲基杆菌DC ‑1和施氏 假单胞菌IHB618的悬浮液； (5)将等体积的门多萨假单胞菌IHB602、 甲基杆菌DC ‑1和施氏假单胞菌IHB618的悬浮 液混合， 并记录OD600值； 使用聚集指数计算共聚集的百分比， 获得最优 共聚集组合菌剂； 所述共聚集指数的公式为： 其中， At为静置时间为t小时的OD600数值； A0为静置时间为0时的OD600数值。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于： 所述共聚集缓冲液为CaCl2、 NaCl、 Tris和 MgCl2的混合溶 液。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于： 所述混合溶液中各物质的浓度分别为： 1mM CaCl2， 150mM NaCl， 10mM  Tris， 1mM MgCl2。 11.权利要求1所述的门多萨假单胞菌IHB602、 权利 要求2所述的甲基杆菌DC ‑1、 权利要 求3所述的施氏假单 胞菌IHB618和/或权利要求6所述的组合菌剂在废水处 理中的应用。 12.根据权利要求11所述的应用， 其特征在于： 所述的应用发生于序批式生物膜反应器权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115386517 A 2中。 13.一种废水处 理的方法， 其特 征在于： 所述的方法包括以下步骤： (1)在生物膜反应器中添加门多萨假单胞菌IHB602、 甲基杆菌DC ‑1、 施氏假单胞菌 IHB618和/或好氧反硝化组合菌剂， 测量并分析生物 膜的厚度和含量； (2)通入废水， 进行废水处 理； (3)在反应 器稳定运行时， 检测高效共聚集脱氮菌剂的丰度。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115386517 A 3