(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210761624.X (22)申请日 2022.06.29 (71)申请人 中国农业大 学 地址 100193 北京市海淀区 圆明园西路2号 (72)发明人 王磊　张子薇　杜显元　李丹丹　 李嘉幸　符杰莹　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 张璐 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) B09C 1/10(2006.01) C12R 1/22(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种复合菌剂及其应用 (57)摘要 本发明涉及微生物 技术领域， 尤其涉及一种 复合菌剂及其应用。 本发明分离得到一种可降解 石油的寡氮菌， 其属于潘多拉菌属， 本发明将其 命名为潘多拉菌E5， 其本身具备一定降解石油的 能力。 本发明进一步提供潘多拉菌E5和固氮菌PJ   3‑5的组合， 将这两种菌株组合后， 可以有效提高 潘多拉菌E5降解石油的能力， 具体在降解石油中 的各类烷烃和芳香烃的效率上显著提高。 本发明 提供的潘多拉菌E5和固氮菌PJ  3‑5的互生组合 可以实现氮素需求的供给， 形成持续稳定的碳氮 交互微环境， 具备较高的石油降解效率， 为石油 污染的微 生物修复技 术提供优势菌种资源。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 115141771 A 2022.10.04 CN 115141771 A 1.一种复合菌剂， 其特征在于， 所述复合菌剂包括： 潘多拉菌E5和具有固氮能力的微生 物。 2.根据权利要求1所述的复合菌剂， 其特征在于， 所述具有固氮能力的微生物为固氮菌 PJ 3‑5。 3.根据权利要求1或2所述的复合菌剂， 其特征在于， 所述潘多拉菌E5和所述具有固氮 能力的微 生物的菌落数比为(1～3)： (1～3)。 4.根据权利要求3所述的复合菌剂， 其特征在于， 所述菌剂中， 所述潘多拉菌 (Pandoraea  pnomenusa)E5的菌落数为107～108cfu/g； 和/或， 所述具有固氮能力的微生物 的菌落数为107～108cfu/g。 5.权利要求1 ‑4任一项所述的复合菌剂在促进固氮菌生长中的应用。 6.权利要求1 ‑4任一项所述的复合菌剂在降解石油中的应用。 7.权利要求1 ‑4任一项所述的复合菌剂在降解C17‑C36的长链烷烃和芳 香烃中的应用。 8.权利要求1 ‑4任一项所述的复合菌剂在石油污染土壤的修复中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115141771 A 2一种复合菌剂及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及微 生物技术领域， 尤其涉及一种复合菌剂及其应用。 背景技术 [0002]石油烃大量进入环境造成的C/N失衡已成为制约生物修复效率的关键因素之一。 养分的可用性在决定碳氢化合物降解群落的性质方面起着重要作用， 因此寻找这些外源氮 肥的天然替代者， 将成为未来生物修复的研究热点。 微生物固氮是一种广泛应用的生物技 术， 作为无机氮改良的替代方法， 并克服了修复过程中的营养缺乏等多种问题。 将固氮菌引 入污染土壤后， 通过生物固氮作用可以为石油降解微生物提供所需的氮。 固氮菌的这一特 性使得此微生物群落适合于原位石油生物修复， 而不需要补充外源氮素， 是修复石油污染 环境的优势菌种资源。 [0003]石油烃作为重要的能源物质， 在开采或运输中造成环境问题。 作为持久性的有机 污染物对生态系统造成破坏。 环境污染， 预防为主， 治理为辅， 石油污染治理仍是重要关注 问题。 生物修复是符合绿色发展要求的技术手段， 但同时也存在一定的局限， 有效氮的相对 缺乏是限制生物修复 效率的一个重要因素。 发明内容 [0004]为了解决现有技术的技术问题， 本发明提供一种复合菌剂及其应用， 通过组合潘 多拉菌E5和具有固氮能力的固氮菌， 可以有效降解环境中的石油污染。 [0005]第一方面， 本发明提供一种复合菌剂， 所述复合菌剂包括： 潘多拉菌E5和具有固氮 能力的微 生物。 [0006]潘多拉菌E5公开于“李方玲,张雅坤,梁立宝,王小通,杜显元,王磊.石油污 染环境 中固氮和寡氮营养细菌的分离鉴定及其特性.微生物学报,2022,62(2):661 ‑671。 是其中表 3涉及的Pandoraea  sp.E5。 [0007]进一步地， 所述具有固氮能力的微 生物为固氮菌PJ  3‑5。 [0008]该微生物保藏编号 为CGMCC No.14658， 公开于专利CN2018102 98858.9。 [0009]本发明将在石油污染条件下具有高效固氮能力的固氮菌Klebsiella  sp.PJ 3‑5 和能适应石油污染低氮环境的寡氮菌Pandor aea sp.E5进行复配， 构建和培育适应贫氮环 境的高效降解菌株组合， 并探究生物 修复主角 ‑微生物的协作机制， 为提高生物修复技术的 应用效果打下基础。 [0010]进一步地， 所述潘多拉菌E5和所述具有固氮能力的微生物的菌落数比为(1～3)： (1～3)。 [0011]进一步地， 所述菌剂中， 所述潘多拉菌(Pandoraea  pnomenusa)E5的菌落数为107 ～108cfu/g； 和/或， 所述具有固氮能力的微 生物的菌落数为107～108cfu/g。 [0012]本发明进一 步提供所述复合菌剂在促进固氮菌生长中的应用。 [0013]本发明进一 步提供所述复合菌剂在降解石油中的应用。说　明　书 1/5 页 3 CN 115141771 A 3