(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210920265.8 (22)申请日 2022.08.02 (83)生物保 藏信息 CGMCC No. 23937 2021.1 1.19 CGMCC No. 23938 2021.1 1.19 CGMCC No.40205 2022.05.26 (71)申请人 山西农业大 学 地址 030800 山西省晋中市太 谷县铭贤南 路兴农街1号 (72)发明人 陈哲　梁宏　黄静　李志强　 (74)专利代理 机构 太原晋科知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 14110 专利代理师 翟冲燕 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)A01N 63/22(2020.01) A01P 3/00(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种复合微生物菌剂及其制备方法和在防 治草莓空心病中的应用 (57)摘要 本发明属于生物防治草莓病技术领域， 为了 解决目前草莓空心病还没有有效的解决问题， 提 供了一种复合微生物菌剂及其制备方法和在防 治草莓空心病中的应用。 由阿氏芽孢杆菌 （Bacillus  aryabhattai ） cc‑2‑jd的发酵液和漳 州芽孢杆菌 （ Bacillus  zhangzhouensis ） cc‑4‑ jz的发酵液按照体积比为1:2、 1:3、 3:2或2:3混 合而成； 其中， 所述阿氏芽孢杆菌、 漳州芽孢杆菌 保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心， 地址 为北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏编号分 别为： CGMCC  No.23937和CGMCC  No.23938。 制备 方法简单， 在草莓促 生和防病都有良好的效果。 权利要求书1页 说明书7页 附图4页 CN 115305221 A 2022.11.08 CN 115305221 A 1.一种复合微生物菌剂， 其特征在于： 由阿氏芽孢杆菌 （ Bacillus  aryabhattai ） cc‑2‑ jd的发酵液和漳州芽孢杆菌 （ Bacillus  zhangzhouensis ） cc‑4‑jz的发酵液按照体积比为 1:2、 1:3、 3:2或2:3混合而成； 其中， 所述阿氏芽孢杆菌 （ Bacillus  aryabhattai ） cc‑2‑jd和 漳州芽孢杆菌 （ Bacillus  zhangzhouensis ） cc‑4‑jz保藏于 中国普通微生物菌种保藏管理 中心， 地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 中国科学院微生物研究所， 保藏编号分别 为： CGMCC No. 23937和 CGMCC No. 23938。 2.根据权利要求1所述的一种复合微生物菌剂， 其特征在于： 所述复合微生物菌剂由阿 氏芽孢杆菌 （ Bacillus  aryabhattai ） cc‑2‑jd的发酵液和漳州芽孢杆菌 （ Bacillus   zhangzhouensis ） cc‑4‑jz的发酵 液按照体积比为1:3混合而成。 3.制备权利要求1或2所述的复合 微生物菌剂的方法， 其特 征在于： 具体步骤为： 菌株发酵液 的制备： 阿氏芽孢杆菌 （ Bacillus  aryabhattai ） cc‑2‑jd和漳州芽孢杆菌 （Bacillus  zhangzhouen sis） cc‑4‑jz分别接种于LB液体培养基中， 28℃、 150  r/min振荡培 养72～84 h， 当菌液浓度达 到1×109 cfu/mL时， 收集菌液 备用； （2） 复合 微生物菌剂的制备： 将发酵 液按照体积比混合。 4.权利要求1或2所述的复合微生物菌剂在防治草莓空心病中的应用， 其特征在于： 所 述空心病病菌为棒孢新拟盘多毛孢 Neopestalotiop sis clavispora ， 命名为CMSF ‑1， 已保 藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏号为CGMCC  No. 40205； 所述复 合微生物菌剂的具体应用方法为： 草莓定植后将复合微生物菌剂进行灌根处理， 具体用量 为每株草莓10 0 ml菌液。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115305221 A 2一种复合微生物菌剂及其制备方 法和在防治草莓空心病中的 应用 技术领域 [0001]本发明属于生物防治草莓病技术领域， 具体涉及 一种复合微生物菌剂及其制备方 法和在防治草莓空心病中的应用。 背景技术 [0002]近两年来， 草莓种植区出现了一种新症状的病害， 国内多地包括北京、 辽宁、 河北、 陕西、 山东、 浙江、 甘肃、 云南、 河南等大部分草莓种植区均有发现， 并随着种苗的运输等因 素逐渐在国内蔓延开 来， 已严重影响我国草莓产业的健康发展。 [0003]在草莓种植过程中， 炭疽病和根腐病是常常会出现的草莓病害， 二者一般在草莓 定植后一个月内发病， 发现后还可以及时补苗， 挽回一定的损失； 而新 发现的这种病害发病 大都是在草莓 现蕾之后， 此时已经错过最佳补苗阶段， 再加上此病害一旦 发病， 发病面积极 大， 因而由于死苗造成的损失将无法弥补。 [0004]目前， 这种新症状病害还没有正式的名称， 国内还没有机构严格按照植物病害认 定的科赫法则做出确切答案， 莓农大多称其为 “空心病”或“断头病”。 根据田间观 察的结果， 发现此病害最初表现为叶片背部出现不规则的斑块 （图1） ， 点状发生， 逐步增多； 当病原菌 侵染草莓茎基部后， 短缩茎发生病变， 内部呈现水烫状， 即空心的状态 （图2） ， 而且用手轻轻 一掰短缩茎就会断掉， 所以有了上面的空心病或断头病之称。 本发明将此种病害称为空心 病。 [0005]阿氏芽孢杆菌， 在工业、 食品业、 农业、 医疗方面国已有许多研究报道， 包括大分子 化合物降解与合 成， 促进植物对 金属离子、 干旱与病害等逆境的耐受性。 生物降解与合 成功 能， 植物促生作用， 均是阿氏芽孢杆菌 分泌的酶或者活性代谢产 物所影响的。 漳州芽孢杆菌 是2016年报道的一个芽孢杆菌的新物种， 分离自我国漳州养虾场的水中， 有报道称此菌株 可以发酵 桑叶粉、 可以降解氨 氮， 也可以作为 生防菌使用。 [0006]前期自患有空心病的草莓植株根部分离纯化到一株病原菌， 根据形态学鉴定以及 分子生物学鉴定， 确定此菌为棒孢新拟盘多毛孢 Neopestalotiopsis  clavispora ， 命名为 CMSF‑1， 保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心， 地址为北京市朝 阳区北辰西路1号院3 号， 中国科学院微生物研究所， 保藏编号分别为： CGMCC  No.40205， 保藏日期为2022年5月26 日 。 [0007]菌株CMSF ‑1在PDA培养基上的生长状态： 菌落呈白色丝绒状， 近圆形， 边缘规则， 表 面呈波浪状， 后期菌落正面未见明显的色素产生， 菌落背面为淡橘 黄色 （图3） 。 生长15 d 后 菌落上可见黑色圆形油状小点， 即为分生孢子盘。 分生孢子呈纺锤形或长梭 形 （图4） ， 共5个 细胞， 4个隔膜， 分 隔处缢缩不明显， 顶端与基部细胞颜色较淡， 多 数呈透明状， 中间3个细胞 颜色较深， 多为褐色， 顶端有2根不分支的附属丝， 无色透明， 基部细胞具一小柄。 根据形态 学特征， 初步判断该病原菌属于新拟盘多 毛孢属。 [0008]同时， 我们对菌株的ITS基因序列 进行测序分析， 测 序结果显示菌株CMSF ‑1为棒孢说　明　书 1/7 页 3 CN 115305221 A 3