(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210639204.4 (22)申请日 2022.06.08 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114717168 A (43)申请公布日 2022.07.08 (73)专利权人 微康益生菌(苏州)股份有限公司 地址 215200 江苏省苏州市吴江经济技 术 开发区龙桥路10 33号 (72)发明人 方曙光　盖忠辉　董瑶　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 专利代理师 边人洲 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12Q 1/04(2006.01)C12Q 1/10(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 1/04(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 3/04(2006.01) C12R 1/225(2006.01) C12R 1/19(2006.01) C12R 1/42(2006.01) C12R 1/22(2006.01) C12R 1/385(2006.01) C12R 1/01(2006.01) 审查员 邵文博 (54)发明名称 一种基于抑制脂多糖产生的功能性益生菌 的筛选方法 (57)摘要 本发明涉及一种基于抑制脂多糖产生的功 能性益生菌的筛选方法， 所述筛选方法包括测试 候选益生菌的抑制脂多糖产生的能力， 具体包 括： 将候选益生菌与产脂多糖的菌株共培养， 得 培养液， 检测培养液中脂多糖的浓度， 选择脂多 糖的浓度低的对应的候选益生菌作为筛选得到 的功能性益生菌； 所述产脂多糖的菌株包括大肠 埃希氏菌、 肠炎沙门氏菌、 阴沟肠杆菌、 福氏志贺 氏菌、 幽门螺杆菌、 肺炎克雷伯菌、 鲍曼不动杆菌 或铜绿假单胞菌中的任意一种或至少两种的组 合。 所述筛选方法操作简单， 试剂成本低， 适于进 行高通量实验， 高效且成功率高， 具有重要的应 用价值。 权利要求书1页 说明书11页 附图2页 CN 114717168 B 2022.09.20 CN 114717168 B 1.一种基于抑制脂多糖产生的功能性益生菌的筛选方法在筛选抗幽门螺杆菌感染的 菌株中的应用， 其特征在于， 所述筛选方法包括测试候选益生菌的抑制脂多糖产生的能力， 具体包括： 将候选益生菌与产脂多糖的菌株共培养， 得培养液， 检测培养液中脂多糖的浓 度， 选择脂多糖的浓度低的对应的候选益 生菌作为筛 选得到的功能性 益生菌； 所述产脂多糖的菌株为幽门螺杆菌 。 2.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述共培养的温度为35 ‑40℃， 时间为12 ‑24  h。 3.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述共培养中所用的培养基中包括胰蛋白 胨、 酵母粉、 氯化钠、 牛肉膏、 磷酸氢二钾、 葡萄糖、 牛心浸出粉或胎牛血清中的任意一种或 至少两种的组合。 4.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述检测是指使用脂多糖ELISA检测试剂盒 进行检测。 5.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述筛选方法还包括对候选益生菌进行耐胃 肠液能力测试和/或 耐胆盐能力测试。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述耐胃肠液能力测试包括： 将候选益生菌 与人工模拟胃液混合， 在36 ‑38℃下孵育2 ‑4 h， 得第一混合液， 将第一混合液与人工模拟肠 液混合， 在36 ‑38℃下孵育6 ‑10 h， 得第二混合液， 检测第二混合液中的活菌数， 计算候选益 生菌的存活率， 存活率越高说明候选益 生菌的耐胃肠液能力越强。 7.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述耐胆盐能力测试包括： 将候选益生菌接 种于含有质量百分含量为0.2% ‑0.4%的胆盐的培养基中， 在36 ‑38℃下孵育3 ‑5 h， 得培养 液， 检测培 养液在600 nm处的吸光度， 吸光度越大说明候选益 生菌的耐胆盐能力越强。 8.如权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 所述筛 选方法包括如下步骤： （1） 将候选益生菌与人工模拟胃液混合， 在36 ‑38℃下孵育2 ‑4 h， 得第一混合液， 将第 一混合液与人工模拟肠液混合， 在36 ‑38℃下孵育6 ‑10 h， 得第二混合液， 检测第二混合液 中的活菌数， 计算 候选益生菌的存活率， 选择存活率高的候选益 生菌进行 下一步测试； （2） 将步骤 （1） 筛选得到的候选益生菌接种于含有质量百分含量为0.2% ‑0.4%的胆盐的 培养基中， 在36 ‑38℃下孵育3 ‑5 h， 得培养液， 检测培养液在600  nm处的吸光度， 选择 吸光 度大的候选益 生菌进行 下一步测试； （3） 将步骤 （2） 筛选得到的候选益生菌与产脂多糖的菌株在35 ‑40℃下共培养16 ‑20 h， 得培养液， 将培养液离心， 收集上清， 过滤， 收集上清液， 用脂多糖ELISA检测试剂盒检测上 清液中的脂多糖浓度， 选择脂多糖的浓度低的对应的候选益生菌作为筛选得到的功能性益 生菌。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114717168 B 2一种基于抑制脂多糖产生的功能性益生菌的筛选方 法 技术领域 [0001]本发明属于微生物技术领域， 涉及一种基于抑制脂多糖产生的功能性益生菌的筛 选方法。 背景技术 [0002]益生菌制剂由于其具有安全性好， 且不会产生副作用的优势， 已被广泛应用于多 种疾病的预防或治疗中， 尤其是与胃肠功能、 代谢相关的疾病， 因此， 近年来， 研究人员致力 于鉴定能够 对人类健康产生可重复性有益作用的益生菌菌株， 以用于相应疾病的预防或治 疗中。 [0003]然而， 功能性益生菌的鉴定是一个复杂且耗时耗力的过程， 事实上， 目前功能性益 生菌的发现很大程度上是通过经验性的自上而下 的方法， 即， 研究不同健康状态下 的个体 中的微生物分布， 那些通常在健康状态的个体中富集的微生物被认为是有益的， 然后对其 进行测试和验证。 在过去的一个世纪里， 这种 经验性的方法导致了一系列益生菌候选物的 发现， 包括一些双歧杆菌和乳杆菌菌株， 随后是大肠杆菌Nissle  1917， 最近是嗜黏蛋白阿 克曼氏菌 （Akkermansia  muciniphila） 。 虽然这种经验自上而下的方法为益生菌的开发提 供了强大 的先导， 但在缺 乏先验机制信息的情况下， 它本质上需要多个循环的试验和试错 来确定菌株对健康的益处， 这导致了不同文献之间有时会产生相互矛盾 （它们的疗效证据 有时是不 一致的） ， 从而 使循证临床指南的益 生菌使用规则的制定变得复杂。 [0004]综上所述， 现有技术存在的问题是： 现有功能性益生菌的筛选方法操作复杂， 效率 低， 且筛选结果可能会有矛盾。 因此， 如何提供一种简单高效的功能性益生菌的筛选方法， 提高功能性 益生菌筛选的成功率， 成为本领域 技术人员亟 待解决的问题。 发明内容 [0005]针对现有技术的不足， 本发明的目的在于提供一种基于抑制脂多糖产生的功能性 益生菌的筛 选方法。 [0006]为达到此发明目的， 本发明采用以下技 术方案： [0007]第一方面， 本发明提供一种基于抑制脂多糖产生的功能性益生菌 的筛选方法， 所 述筛选方法包括测试候选益生菌的抑制 脂多糖产生的能力， 具体包括： 将候选益生菌与产 脂多糖的菌株共培养， 得培养液， 检测培养液中脂多糖的浓度， 选择脂多糖的浓度低的对应 的候选益 生菌作为筛 选得到的功能性 益生菌； [0008]所述产脂多糖的菌株包括大肠埃希氏菌、 肠炎沙门氏菌、 阴沟肠杆菌、 福氏志贺氏 菌、 幽门螺杆菌、 肺炎克雷伯菌、 鲍曼不动杆菌或铜绿假单胞菌中的任意一种或至少两种的 组合。 [0009]所述至少两种的组合例如大肠埃希氏菌与肠炎沙门氏菌的组合、 阴沟肠杆菌和福 氏志贺氏菌的组合、 幽门螺杆菌和肺炎克 雷伯菌的组合 等， 其他任意的组合方式均可。 [0010]优选地， 所述共培 养的温度为3 5‑40℃， 时间为12 ‑24 h。说　明　书 1/11 页 3 CN 114717168 B 3