(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210846947.9 (22)申请日 2022.07.06 (71)申请人 安徽天安 生物科技股份有限公司 地址 237200 安徽省六安市霍山县 衡山镇 迎驾大道西路8 88号 (72)发明人 陈宏　 (74)专利代理 机构 合肥中博知信知识产权代理 有限公司 34142 专利代理师 李金标 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/04(2006.01) A23K 10/18(2016.01) A23K 10/30(2016.01) C12R 1/46(2006.01) (54)发明名称 一种基于山楂水提物制备的复合菌剂及其 制备方法、 应用 (57)摘要 本发明涉及微生物 技术领域， 特别涉及一种 基于山楂水提物制备的复合菌剂及其制备方法 和应用， 所述方法包括： 1)山楂水提物的制备； 2) 将嗜热链球菌种子液在含有山楂水提物的液体 培养基中培养， 得到嗜热链球菌菌泥； 3)将嗜热 链球菌菌泥与保护剂混合均匀， 冷冻干燥， 得到 嗜热链球菌菌粉； 4)将嗜热链球菌菌粉与山楂粉 混合均匀， 得到复合菌剂； 本发明通过将嗜热链 球菌在含有山楂水提物的培养基中进行培养， 可 以显著提高嗜热链球菌生长繁殖能力和耐酸耐 胆盐的能力； 通过将山楂粉与冻干的嗜热链球菌 菌粉混合得到复合的菌剂可以作为益生菌饲料 添加剂用于养殖业， 且对饲喂的动物无害， 可作 为一种新型绿色饲料添加剂开发应用于养殖行 业。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 115216429 A 2022.10.21 CN 115216429 A 1.一种基于山楂水提物制备复合菌剂的方法， 其特 征在于， 所述方法包括： 1)山楂水提物的制备： 将山楂在 水中煎煮 1‑4h， 过滤后得到煎煮液和残渣， 接着将所述 残渣与水混合后再 煎煮1‑4次， 然后合并多次煎煮得到的煎煮液， 得到山楂水提物； 2)将嗜热链球菌种子液在含有所述山楂水提物的液体培养基中进行培养， 得到嗜热链 球菌菌泥； 3)将所述嗜热链球菌菌泥与保护剂混合均匀， 然后进行冷冻干燥， 得到嗜热链球菌菌 粉； 4)将所述嗜热链球菌 菌粉与山楂粉混合均匀， 得到复合菌剂。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤1)中， 所述山楂与水的重量比为1:5 ‑ 15； 所述残渣与所述水的重量比为1:5 ‑15。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中， 所述山楂水提物 的体积用量为 所述液体培 养基的体积的1 ‑15vol％。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 制备所述嗜热链球菌种子液的方法包括： 将嗜热链球菌 接种至MRS液体培 养基中， 在37 ‑40℃下培 养12h， 得到嗜热链球菌种子液。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中， 所述培养的条件包括： 在37 ‑40 ℃下培养2‑48h。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤3)中， 所述冷冻干燥的条件包括： 首先 在‑70～‑90℃下预冻1‑3h， 然后置 于冷冻干燥机中冷冻干燥24 ‑36h。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤3)中， 所述保护剂包括乳糖、 胰蛋白胨 和海藻糖， 所述乳糖、 胰蛋白胨和海藻糖的重量比为1:1 ‑1.5:1.2‑1.6。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤4)中， 所述山楂粉由步骤1)中所述的 山楂水提物干燥制得； 优选地， 所述 山楂粉和所述嗜热链球菌 菌粉的重量比为1 ‑5： 1。 9.根据权利要求1 ‑8任意一项所述的方法制备得到的基于山楂水提物制备的复合菌 剂。 10.根据权利要求9所述的基于山楂水提物制备的复合菌剂作为饲料 添加剂的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115216429 A 2一种基于山楂水提物制备的 复合菌剂及其制备方 法、 应用 技术领域 [0001]本发明涉及 微生物技术领域， 特别涉及一种基于山楂水提物制备的复合菌剂及其 制备方法和应用。 背景技术 [0002]嗜热链球菌来源于乳制品， 它是一种耗氧的革兰氏阳性菌， 以两个卵圆型为一对 的球菌连成约0.7到0.9微米的长链。 在MRS培养基上， 嗜热链球菌会长成米色的菌落。 嗜热 链球菌能够改善肠道 微环境， 降低肠道pH值， 促进肠蠕动防止病原菌定植， 分泌细菌素抑制 病原菌的生长； 而且 可以抑制胆固醇合成酶活性， 降低血清中胆固醇含量， 其 发酵产物可以 调控血压。 嗜热链球菌生成的多糖、 细菌素、 乳酸等具有一定的抗肿瘤活性的作用， 通过激 活机体免疫系统， 抑制细胞的突变来抵抗肿瘤的发生。 [0003]目前， 嗜热链球菌可以作为益生菌饲料添加剂用于养殖业， 但是嗜热链球菌 的生 长繁殖能力和耐酸耐胆盐能力有限， 有 待进一步提高。 发明内容 [0004]针对现有技术中的问题， 本发明的目的在于提供一种基于山楂水提物制备复合菌 剂的方法， 以改善嗜热链球菌的生长 繁殖能力和耐酸耐胆盐的能力。 [0005]为了实现上述目的， 本发明采用以下技 术方案予以实现： [0006]一种基于山楂水提物制备复合菌剂的方法， 所述方法包括： [0007]1)山楂水提物的制备： 将山楂在水中煎煮1 ‑4h， 过滤后得到煎煮 液和残渣， 接着将 所述残渣与水混合后再 煎煮1‑4次， 然后合并多次煎煮得到的煎煮液， 得到山楂水提物； [0008]2)将嗜热链球菌种子液在含有所述山楂水提物的液体培养基中进行培养， 得到嗜 热链球菌 菌泥； [0009]3)将所述嗜热链球菌菌泥与保护剂混合均匀， 然后进行冷冻干燥， 得到嗜热链球 菌菌粉； [0010]4)将所述嗜热链球菌 菌粉与山楂粉混合均匀， 得到复合菌剂。 [0011]在进一步的技术方案中， 步骤1)中， 所述 山楂与水的重量比为1:5 ‑15； [0012]所述残渣与所述水的重量比为1:5 ‑15。 [0013]在进一步的技术方案中， 步骤2)中， 所述山楂水提物的体积用量为所述液体培养 基的体积的1 ‑15vol％。 [0014]在进一步的技术方案中， 制 备所述嗜热链球菌种子液的方法包括： 将嗜热链球菌 接种至MRS液体培 养基中， 在37 ‑40℃下培 养12h， 得到嗜热链球菌种子液。 [0015]在进一步的技术方案中， 步骤2)中， 所述培养的条件包括： 在37 ‑40℃下培养2 ‑ 48h。 [0016]在进一步的技术方案中， 步骤3)中， 所述冷冻干燥的条件包括： 首先在 ‑70～‑90℃ 下预冻1‑3h， 然后置 于冷冻干燥机中冷冻干燥24 ‑36h。说　明　书 1/4 页 3 CN 115216429 A 3