(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210949187.4 (22)申请日 2022.08.09 (71)申请人 重庆市两川农业科技有限公司 地址 408400 重庆市南川区东城街道办事 处龙岩河居委15组(创生生物科技)2 幢 (72)发明人 包善飞　丁显平　 (74)专利代理 机构 北京国坤专利代理事务所 (普通合伙) 11491 专利代理师 赵红霞 (51)Int.Cl. C09K 17/40(2006.01) C05F 15/00(2006.01) C05F 17/20(2020.01) C05F 17/70(2020.01)B09C 1/10(2006.01) B09C 1/02(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种基于复合微生物的土壤修复剂及制备 方法 (57)摘要 本发明属于土壤修复技术领域， 公开了一种 基于复合微生物的土壤修复剂及制备方法， 基于 复合微生物的土壤修复剂 按照质量份数计， 由有 机发酵物20～40份、 生物有机肥15～20份、 纳米 多孔矿物载体12～16份、 蛋白肽10～15份、 可降 解树脂8～12份、 膨润土7～8份、 海藻粉6～9份、 壳聚糖5～ 6份、 黄腐酸钾3～ 5份、 枯草芽孢杆菌2 ～4份组成。 本发明制备的枯草芽孢杆菌能够大 大提高了土壤的去污能力， 修复周期短， 最快3 天、 最慢7天即可完成符合国家要求的污染土壤 修复过程。 本发明修复效果好， 对镉、 硝基苯等多 种污染物的脱除率都在98％以上， 且对环 境影响 小， 使用的均是低毒无毒物质， 减小了对土壤和 周边环境的二次污染。 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 CN 115368909 A 2022.11.22 CN 115368909 A 1.一种基于复合微生物的土壤修复剂的制备方法， 其特征在于， 所述基于复合微生物 的土壤修复剂的制备 方法包括以下步骤： 步骤一， 进行枯草芽孢杆菌的制备： 利用蛋白胨、 氯化钠、 牛肉浸粉以及蒸馏水配制牛 肉膏蛋白胨培养液； 将枯草芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养液， 活化， 离心， 加入预处理 的远红外细菌 屋， 培养， 得固定化 枯草芽孢杆菌； 步骤二， 进行纳米多孔矿物载体的预处理： 将制备得到的纳米多孔矿物载体采用酸或 碱溶液进 行处理后， 置于离心装置内进 行3～5次离心， 经洗涤后， 将纳米多孔矿物载体在60 ～120℃的温度下干燥6～ 24h， 备用； 步骤三， 进行原料的称取： 按照质量份数分别称取有机发酵物30份、 生物有机肥15份、 纳米多孔矿物载体12份、 蛋白肽10份、 可降解树脂8份、 膨润土8份、 海藻粉6份、 壳聚糖5份、 黄腐酸钾4份以及枯 草芽孢杆菌2份备用； 步骤四， 进行土壤修复剂的制备： 将可降解树脂和壳聚糖粉碎过筛后加水， 再加入有机 发酵物、 生物有机肥、 蛋白肽、 膨润土、 海藻粉、 黄腐酸钾和枯草芽孢杆菌发酵， 将发酵产物 加入纳米多孔矿物载体中， 得到 土壤修复剂。 2.如权利要求1所述的基于复合微生物的土壤修复剂的制备方法， 其特征在于， 所述步 骤一中的枯 草芽孢杆菌的制备 方法包括： (1)配制牛肉膏蛋白胨培养液： 选取蛋白胨11g、 氯化钠6g、 牛肉浸粉4g， 调节pH值至 7.5， 加入1000mL蒸馏水中， 搅拌加热至溶解， 于120～125℃条件下高压灭菌15～30min， 得 牛肉膏蛋白胨培 养液； (2)活化枯草芽孢杆菌： 在无菌的条件下取一环枯草芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培 养液中， 在3 0℃下恒温摇床培 养24～36h， 得枯草芽孢杆菌 菌悬液； (3)将长为2 mm、 宽为2 mm的远红外细菌屋用浓度为0.1mol/L的HCl浸泡2～4h后， 用去离 子水冲洗 至中性， 烘干； (4)将30g经过步骤三处理的远红外细菌屋放入100mL牛肉膏蛋白胨培养液中， 取20mL 步骤二得到的枯 草芽孢杆菌 菌悬液进行离心， 获得菌体沉淀； (5)在无菌的环境下将菌体沉淀加入到含有远红外细菌屋的牛肉膏蛋白胨培养液中， 在30℃恒温培 养箱中固定培养36～48h， 得到固定化 枯草芽孢杆菌 。 3.如权利要求1所述的基于复合微生物的土壤修复剂的制备方法， 其特征在于， 所述步 骤二中的预处理的酸或碱为盐酸、 硫酸、 硝酸、 氢氧化钠或氢氧化钾中的任意一种； 所述纳 米多孔矿物载体的制备 方法包括： (1)将膨胀珍珠岩、 海泡石、 球粘土、 白炭黑和碳化硅微粉混合并搅拌均匀得初混料， 再 加入初混料质量0.2 ～0.4％的聚丙烯酸， 搅拌均匀； (2)在球磨机中加水， 将步骤(1)得到的混合物粉碎并混合2～4h后， 再加入谷糠粉， 混 合40～60min后出磨， 脱 去水分后制成粉体或泥 膏； (3)以滚动法搪粒工艺成型或湿法可塑挤出工艺成型， 制成圆球状或拉西环状， 烘干后 于窑炉内在80 0～900℃下煅烧3～6 h， 得纳米多孔矿物载体。 4.如权利要求1所述的基于复合微生物的土壤修复剂的制备方法， 其特征在于， 所述步 骤三中的生物有机肥的制备 方法包括： (1)将菌棒置于粉碎装置中进行粉碎并过30～40目筛， 得到粉碎的菌棒； 将废弃、 腐烂权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115368909 A 2的柑橘收集 起来进行破碎， 得到 烂柑子； (2)将动物粪便、 粉碎的菌棒、 油枯和腐秆剂均匀混合， 得到混合料； 将烂柑子进行固液 分离得到的柑橘汁液接入混合料内， 得发酵物料； (3)向所述发酵物料中加入腐秆剂， 升温至70～75℃， 每天翻堆1～2次， 发酵7～14天， 降温至30℃， 发酵至含水量小于 30％得到生物有机肥。 5.如权利要求1所述的基于复合微生物的土壤修复剂的制备方法， 其特征在于， 所述步 骤四中的土壤修复剂的制备 方法包括： (1)将可降解树脂和壳聚糖通过粉碎搅拌机粉碎， 研磨并过180～200目筛； 将过筛得到 的粉末搅拌均匀得到混合物， 加入同量水 得到混合溶 液； (2)将有机发酵物、 生物有机肥、 蛋白肽、 膨润土、 海藻粉以及黄腐酸钾投入至所述混合 溶液中， 于13 00rpm的转速搅拌40mi n， 得混合物料； (3)向步骤(2)得到的混合物料中加入枯草芽孢杆菌并在35℃的环境中发酵2天， 将发 酵产物加入纳米多孔矿物载体中， 得到 土壤修复剂。 6.一种应用如权利要求1～5任意一项所述的基于复合微生物的土壤修复剂的制备方 法制备得到的基于复合微生物的土壤修复剂， 其特征在于， 所述基于复合微生物的土壤修 复剂按照质量份数计， 由有机发酵物20～ 40份、 生物有机肥15～20份、 纳米多孔矿物载体12 ～16份、 蛋白肽 10～15份、 可降解树脂8～12份、 膨润土7～8份、 海藻粉6～9份、 壳聚糖5～6 份、 黄腐酸钾3～5份、 枯 草芽孢杆菌2 ～4份组成。 7.如权利要求6所述的基于复合微生物的土壤修复剂， 其特征在于， 所述生物有机肥按 照质量份数计， 由动物粪便50～60份、 菌棒25～35份、 油枯8～12 份、 烂柑子5～10份、 腐秆剂 4～8份组成。 8.如权利要求6所述的基于复合微生物的土壤修复剂， 其特征在于， 所述多孔矿物载体 为沸石、 膨胀蛭石、 膨胀珍珠岩、 凹凸棒石、 海泡石、 球粘土或硅 藻土中的任意一种或多种的 组合物； 所述可降解树脂为聚乳酸、 聚丁二酸丁二醇酯 或聚羟基脂肪酸酯中的任意一种或多种 的组合物。 9.一种实施如权利要求6～8任意一项所述的基于复合微生物的土壤修复剂的土壤修 复方法， 其特 征在于， 所述土壤修复方法包括： (1)通过实验检测获得待处理的土壤， 并通过粉碎研磨设备将待处理的土壤破碎、 研 磨， 并调节土壤的pH值； (2)向所述土壤修复剂中加入水配置成土壤修复剂水溶液， 并将配置好的所述土壤修 复剂水溶液与土壤按照预设比例进行多次淋洗； (3)将淋洗 完成后的土壤经通 风、 加热， 获得修复好的土壤。 10.如权利要求9所述的土壤修复方法， 其特 征在于， 所述土壤的pH值调节至7； 所述土壤修复剂水 溶液中所述螯合剂的浓度为0.0 5mol/L； 所述预设比例为所述土壤与所述土壤修复剂的固液比为1： 10～12； 所述淋洗次数为3～5次。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115368909 A 3