(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210946713.1 (22)申请日 2022.08.08 (71)申请人 广西大学 地址 530005 广西壮 族自治区南宁市大 学 东路100号 (72)发明人 廖艳娟　罗廷荣　李晓宁　栗朵朵　 蔡宗伶　 (74)专利代理 机构 北京鼎德宝 专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 11823 专利代理师 钟西飞 (51)Int.Cl. C12P 3/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01) B22F 9/24(2006.01) B22F 1/054(2022.01)B82Y 40/00(2011.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种基于光合细菌菌体浸泡液制备银纳米 颗粒的方法 (57)摘要 本发明涉及纳米材料制备领域， 具体涉及一 种基于光合细菌菌体浸泡液制备银纳米颗粒的 方法， 在优化培养的光合细菌菌体滤液中加入 3mol/L的新鲜AgNO3溶液， pH为7， 30℃， 4W/m2光 照培养下培养90min， 即可得到边长约为50nm的 银纳米立方体。 本发明合成得到了边长约为 50nm、 高质量、 粒径、 形貌均一的银纳米立方体， 为后续的应用研究， 比如合成金纳米笼、 负载药 物进行治 疗研究提供了良好的基础。 权利要求书1页 说明书9页 附图6页 CN 115491390 A 2022.12.20 CN 115491390 A 1.一种基于光合细菌菌体浸泡液制备银纳米颗粒的方法， 其特征在于： 在优化培养的 光合细菌菌体滤液中加入3mol/L的新鲜AgNO3溶液， pH为7， 30℃， 4W/m2光照培养下培养 90min， 即可得到边长约为5 0nm的银纳米立方体。 2.如权利要求1所述的一种基于光合细菌菌体浸泡液制备银纳米颗粒的方法， 其特征 在于： 包括如下步骤： S1、 菌种孵化 沼泽红假单胞菌CICC  2312菌液： 液体培养基＝1： 1， 活化， 光照培养箱中， 32℃， 4W/m2培 养72h； S2、 接种 配制500mL液体培养基， 消毒灭菌后， 吸取2000μL菌体接种于500mL液体培养基中， 摇 匀， 置于光照培 养箱中， 32℃， 4 W/m2培养72h； S3、 离心 将培养好的菌液在8000r/min下离心10min， 弃上清， 小心保留沉淀， 用蒸馏水清洗离心 菌体3次(8000r/min， 10min)， 将沉淀转移 至250mL蒸馏水中培养， 置于光照培养箱中， 32℃， 4W/m2培养72h； S4、 离心、 过 滤 将250mL培养后的菌体浸泡液在5000r/min下， 离心15min， 保留上清液， 用孔径为0.45 μ m的微孔滤膜进行二次过 滤后， 得到纯 净的菌体浸泡液； S5、 银纳米颗粒的制备 在所得的纯净的菌体浸泡液中加入3mol/L的新鲜AgNO3溶液， pH为7， 30℃， 4W/m2光照培 养下培养90min， 即可得到边长约为5 0nm的银纳米立方体。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115491390 A 2一种基于光合细菌 菌体浸泡液制备银纳米颗粒的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及纳米材料制 备领域， 具体涉及一种基于光合细菌菌体浸泡液制  备银 纳米颗粒的方法。 背景技术 [0002]纳米技术因在不同技术和科学领域地广泛应用而迅速发展 成为了一个新  兴应用 的领域。 由于其广泛的应用， 合成纳米材料的方法也得到了不断地发展。  传统的物理或化 学法因为所需试验条件简单、 成本低和节能等优点而 得到很好  的应用， 在目前商业性规模 生产中也大多采用这些方法。 但有些化学试剂在一  定程度上对人体或环境 都有危害， 有的 稳定剂或分散剂甚至还有致癌性， 因此  限制了其在更宽领域的应用。 为了拓宽纳米材料的 应用领域， 开发环保的、 友  好的合成材 料， 安全绿色的生物还原法应运而生。 [0003]目前， 在很多关于生物合成金属及金属化合物纳 米粒子的报道中， 所采用  的生物 材料不尽相同， 多为微生物和植物。 最受青睐的是微生物法。 微生物在  自然界中分布广泛、 数量庞大、 种类多， 采用微生物法制备纳米材料有很大的  发展空间。 以制备银纳米材料为 例的微生物法可分为 三类， ： [0004](1)利用培养细菌的悬浮液： 将培养细菌的菌液进行离心， 将AgNO3加入 到悬浮液 中， 将银离子还原成银单质。 Juibar i等人培养嗜极菌2 4h， 对细菌  培养液进 行离心， 保留悬 浮液， 制得 银纳米颗粒。 [0005](2)利用菌体浸泡液： 将微生物培养的菌液8000rpm离心10分钟， 保留  菌体， 用去 离子水清洗菌体， 除去培养基中的杂质， 再用去离子水浸泡菌体，  如此离心3次， 保留上清 液， 过滤除去杂质。 通过向过滤后的上清液中加入硝  酸银溶液， 将银离子还原成银单质。 Venkataraman等人选用的微生物材料为  真菌半裸镰刀菌， 体外制备得银纳米颗粒， 粒径大 小为10～6 0nm， 大部分呈  球形， 银纳米颗粒能够保存数周。 [0006](3)在菌体内部合成： 将优化培养好 的将微生物， 把菌液进行离心， 弃掉  培养液， 保留菌体， 并用灭菌去离子水反复轻缓清洗菌体， 除去培养基中的杂  质， 然后将菌体加入 到硝酸银溶液中培养， 得到银纳米颗粒。 Mukherjee等人  在银离子溶液中加入轮枝菌 (Verticillium)， 银离 子被还原， 经电子 显微镜表 征显示， 细胞壁内存在银纳米颗粒。 [0007]已有的生物制备法 中， 许多研究利用致病菌做生物材料， 会让纳米颗粒的  使用受 到限制。 [0008]本发明采用光合细菌来制 备银纳米材料， 是因为它具有如下优势： 第一，  光合细 菌是益生菌， 由此生产的产品安全、 可信度高， 在医疗、 药物上可确保  安全使用； 第二， 光合 细菌生长繁殖快， 生产周期短， 便于规模化生产， 实现  自动化控制； 第三， 光合细菌生长条 件不严格， 通过对生长条件优化， 易于生  长， 具有随着生存环境而灵活地改变代谢类型 的 特征因此， 光合细菌是一种极  有利用价值的微生物材料， 因此， 利用光合细菌合成纳米材 料具有重要的意 义。说　明　书 1/9 页 3 CN 115491390 A 3