(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211038165.9 (22)申请日 2022.08.29 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510640 广东省广州市天河区五山路 483号 申请人 广东明基水产集团有限公司 (72)发明人 魏韬　马钰霖　郭玉婧　黄梓晴　 邝嘉骏　顾培芝　何雪乐　伍伟明　 (74)专利代理 机构 深圳天融专利代理事务所 (普通合伙) 44628 专利代理师 杜英 (51)Int.Cl. C07K 7/64(2006.01) C07K 1/14(2006.01) C07K 1/34(2006.01)C12P 21/04(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种基于 XAD16大孔树脂提取表 面活性素的 快速提取方法 (57)摘要 本发明涉及一种基于XAD16大孔树脂提取表 面活性素的快速提取方法， 整个提取过程耗时5   h左右， 与目前常用的酸沉淀法的72  h相比， 提取 速率提高了14.4倍； 同时， 本发明的提取工艺仅 通过对细胞进行破碎操作即可对胞内的表面活 性素进行提取， 操作简单， 有效地降低了提取工 艺的复杂度。 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 CN 115109122 A 2022.09.27 CN 115109122 A 1.一种基于XAD16大孔树脂提取表面活性素的快速提取方法， 其特征在于： 包括如下步 骤： 步骤1： 取50  mL发酵菌液转移至50  mL的离心管中， 在7000 ‑9000 rpm的条件下离心5 ‑ 15 min， 得到上清液1、 及含有菌体以及XAD16大孔 树脂的沉淀物1； 步骤2： 在 所述沉淀物 1中加入甲醇， 而后进行超声 处理， 15‑30min后将混合物倒入三角 瓶中， 先在25 ‑35 ℃、 150‑200 rpm的条件下震荡2 ‑4 h， 而后在7000 ‑9000 rpm的条件下离 心10‑20 min， 得到上清液2； 步骤3： 将所述上清液2通过滤纸过滤到100  mL的尖底烧瓶中， 并使用旋转蒸发仪进行 真空浓缩， 得到粗 提物； 步骤4： 使用0.5 ‑1.5 mL的甲醇对所述粗提物进行溶解， 完全溶解后， 使用移液枪吸出 复溶的粗 提物， 在1 1000‑13000 rpm的条件下离心5 ‑15 min， 即得到表面活性素 溶液。 2.根据权利要求1所述的一种基于XAD16大孔树脂提取表面活性素的快速提取方法， 其 特征在于： 所述 步骤1中发酵菌液的制作步骤如下： S1： 将含有表面活性素的菌株接种至LB平板培养基上， 在37  ℃的条件下活化培养12   h； 而后取活化后的单菌落转接于LB液体培养基中， 在37  ℃、 200 rpm的条件下培养12  h， 得 到种子液； S2： 按照1%的接种量将所述种子液转接至50  mL的MSM培养基中， 并在MSM培养基加入1   mL XAD16， 在3 0 ℃、 200 rpm的条件下发酵48  h， 即得发酵菌液。 3.根据权利要求2所述的一种基于XAD16大孔树脂提取表面活性素的快速提取方法， 其 特征在于： 所述 步骤S1中， 含有表面活性素的菌株为 Bacillus siamensis  JFL15菌株。 4.根据权利要求2所述的一种基于XAD16大孔树脂提取表面活性素的快速提取方法， 其 特征在于： 所述步骤S1中， LB平板培养基的组分为： 胰 蛋白胨 10 g， 酵母提取粉  5 g， NaCl  5 g， 蒸馏水  1000 mL， 琼脂粉20  g； 所述LB平板培养基的pH值 为7.2‑7.4。 5.根据权利要求2所述的一种基于XAD16大孔树脂提取表面活性素的快速提取方法， 其 特征在于： 所述步骤S1中， LB液体培养基的组分为： 胰 蛋白胨 10 g， 酵母提取粉  5 g， NaCl  5 g， 蒸馏水  1000 mL； 所述LB液体培 养基的pH值 为7.2‑7.4。 6.根据权利要求2所述的一种基于XAD16大孔树脂提取表面活性素的快速提取方法， 其 特征在于： 所述步骤S2中， MSM培养基的组分为： 蔗糖  20 g， NH4Cl 4 g， KH2PO4 3 g， Na2HPO4  10 g， MgSO4 0.2 g， 酵母膏  0.2 g， CaCl2 0.7μg， MnSO4 1μg， 蒸馏水  1 L； 所述MSM培养基的 pH值为7.0。 7.根据权利要求2所述的一种基于XAD16大孔树脂提取表面活性素的快速提取方法， 其 特征在于： 所述步骤S2中， 所述XAD16大孔树脂在 使用前需要对其进行预处理， 对 XAD16大孔 树脂进行 预处理的步骤如下： 步骤A： 取250  g的XAD16大孔树脂悬浮在1.5  L去离子水中， 而后用5%的HCl调节悬浮液 的pH值至7.0~7.5， 待XAD16大孔树脂全部沉降至底部后， 倒掉上清液， 得到XAD16大孔树脂 沉淀物； 步骤B： 使用去离子水对步骤A中得到的XAD16大孔树脂沉淀物清洗3 ‑4次； 而后在 XAD16 大孔树脂沉淀物中加入丙酮， 至丙酮没过XAD16大孔树脂1  cm， 浸泡0.5~1.5 h后， 倒掉丙 酮；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115109122 A 2步骤C： 重 复步骤B的操作， 3次后在XAD16大孔树脂沉淀物中加入甲醇至没过XAD16大孔 树脂1 cm， 浸泡2 ‑4 h后倒掉甲醇； 而后使用双蒸水对XAD16大孔树脂进行冲洗， 3~4次后再 使用600 mL的双蒸水保存XAD16大孔树脂， 并对其进行分装， 在121  ℃的条件下灭菌30  min 后备用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115109122 A 3