(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210849159.5 (22)申请日 2022.07.19 (71)申请人 云南利鲁环境建 设有限公司 地址 650503 云南省昆明市高新 技术产业 开发区二环西路220号云南软件园基 地B座第五楼524-4-241号 申请人 云南省交通投资 建设集团有限公司 　 云南楚姚高速公路有限公司 (72)发明人 周应新　甄晓云　钱正富　苏一江　 唐能　刘志义　梁小波　唐忠林　 吴尚峰　曾维成　王东　赵刚　 叶明果　肖芮徵　张伟　 (74)专利代理 机构 成都初阳知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 51305 专利代理师 孙朗(51)Int.Cl. A01G 22/30(2018.01) A01G 24/00(2018.01) A01G 24/23(2018.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/12(2006.01) C12R 1/89(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制备方法 (57)摘要 本发明提供一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮 的制备方法， 涉及环境生物技术领域， 包括原料 的选材， 原料分别为地衣结皮、 苔藓结皮和绿藻 结皮， 现有的单层结皮在环境污染监测使用时密 度较低， 组织 成分单一， 受环境因素限制， 导致对 环境中重金属污染的沉降不足， 采用地衣结皮、 苔藓结皮和绿藻结皮两两组合形成三组原料结 皮进行组织分离培养， 组织培养后再将三组原料 结皮共同培养形成复合结皮进行土壤保护和环 境污染监测使用， 整体密度和复合结皮的丰富度 增加， 针对不同的户外环境复合结皮内部均有对 应环境适配的生物， 不受环境限制， 可实现空气 中和大气降尘的重金属快速吸收， 吸收能力增 强， 便于环境治理使用。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115152561 A 2022.10.11 CN 115152561 A 1.一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制备 方法， 包括原料的选材， 其特 征在于： Sp1： 原料预处理， 所述原料预处理为对选材的原料进行清洗并剪碎为1cm左右的正方 形块， 且原料分别为 地衣结皮、 苔藓结皮和绿藻结皮； Sp2： 制备培养基， 所述制备培养基为制作A、 B、 C、 D四种培养基， 且四种培养基分别为 PDA培养基、 MY培养基、 EMB培养基和BBM培养基； Sp3： 原料分离处理， 所述原料分离处理为对地衣结皮、 苔藓结皮和绿藻结皮取等重量 分别放入离心管中， 振荡洗涤10次， 2min/次， 吸干水分后 分别放置超净工作台用无菌水振 荡洗涤， 振荡洗涤3 0次， 3min/次； Sp4： 原料组合分类， 所述原料组合分类为取原料分离处理后的地衣结皮、 苔藓结皮和 绿藻结皮用无菌研磨棒磨碎， 经无菌擦镜纸过滤洗涤5次， 将原料等量分为三组， 依 次为地 衣结皮和绿藻结皮、 地衣结皮和苔藓结皮、 苔藓结皮与绿藻结皮； Sp5： 组织培养， 所述组织培养为将组织分离中的地衣结皮和绿藻结皮、 地衣结皮和苔 藓结皮、 苔藓结皮与绿藻结皮 分别放置在A、 B、 C三种培 养基中培 养， 培养时间为7h； Sp6： 组合培养， 所述组合培养为将A、 B、 C三个培养基中的三组原料统一移植在D培养基 中进行培 养， 培养时间为5 h； Sp7： 复合结皮表面处理， 所述复合结皮表面处理为对组合培养中取出的复合结皮表面 均匀喷洒木纤维粘接剂， 完成制备。 2.根据权利要求1所述的一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制备方法， 其特征在于： 所 述组织培养中的A培养基的环 境为2000lx光照强度， 采用昼夜交替光照， 光照时间为18 h， 温 度为17℃， 环境空气湿度为6 0％。 3.根据权利要求1所述的一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制备方法， 其特征在于： 所 述组织培养中的B培养基的培养环境为1000lx光照强度， 采用 昼夜交替光照， 光照时间为 8h,温度为15℃， 环境空气湿度为85％。 4.根据权利要求1所述的一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制备方法， 其特征在于： 所 述组织培养中的C培养基的培养环境为1000lx光照强度， 采用 昼夜交替光照， 光照时间为 12h， 白天温度为20℃， 夜晚温度为10℃， 环境空气湿度为70％。 5.根据权利要求1所述的一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制备方法， 其特征在于： 所 述原料预处理为对地衣结皮、 苔藓结皮和绿藻结皮整体表面沙土颗粒进行抖落， 在显微镜 下取出附着的假根并用流动水冲洗2h， 清洗后的原料采用滤纸吸干水分后分类存储在5℃ 环境下冷藏5 0min。 6.根据权利要求1所述的一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制备方法， 其特征在于： 所 述组织培养时针对三组组合地皮分别对应培养的三种培养基可设置多个， 所述组合培养时 采用三种组合原料以1:1:1交替分布排列的方式分布在D培 养基中进行培 养。 7.根据权利要求1所述的一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制备方法， 其特征在于： 所 述复合结皮表 面处理中木纤维粘接剂的浓度为0.1moL/L,且复合结皮表 面面积与木纤维粘 接剂的喷洒 量的比例为1m2:0.5L。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115152561 A 2一种地衣与苔藓、 藻类复合 结皮的制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及环境生物技术领域， 具体为一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制 备方 法。 背景技术 [0002]根据中国专利号为 “CN109337826B ”公开的一种真菌及真菌 ‑蓝藻复合地衣结皮的 快速培育方法本发明中筛选得到的外瓶霉菌Zh2， 属于高产胞外多糖菌株， 将外瓶霉菌Zh2 与蓝藻复合应用于生物结皮人工固沙， 一方面外瓶霉菌Zh2能够为蓝 藻生长提供碳源， 另一 方面能够胶结沙粒使其形成稳定的团聚体， 提高土壤的碳氮含量和土壤酶活性， 改善土壤 理化性质， 显著 促进土壤的营养水平。 本发明将真菌与蓝 藻混合接种于流沙， 能够较快形成 稳定的复合结皮， 培育周期短， 同时提高了人工结皮的稳定性， 加速了 藻类结皮向地衣结皮 演替的过程。 本发明培育的真菌 ‑蓝藻复合地衣结皮， 其抗旱能力显著高于单一藻结皮， 表 明复合结皮能够更好的适应干旱区的严苛环境。 [0003]上述专利文件中的复合结皮仅采用可进行光合作用的蓝藻和地衣进行复合使用， 在使用中仅适用于光照充足， 湿度适宜的环境， 针对湿度较高且光照较少的环 境， 无法进 行 快速生长适配， 对环境的适配性 不高。 发明内容 [0004]解决的技 术问题 [0005]针对现有技术的不足， 本发明提供了一种地衣与苔藓、 藻类复合结皮的制备方法， 解决了现有的针对环境 适配性低的结皮结构问题和结皮结构单一的问题。 [0006]技术方案 [0007]为实现以上目的， 本 发明通过以下技术方案予以实现： 一种地衣与苔藓、 藻类复合 结皮的制备 方法， 包括原料的选材， [0008]Sp1： 原料预处理， 所述原料预处理为对选材的原料进行清洗并剪碎为1cm左右的 正方形块， 且原料分别为 地衣结皮、 苔藓结皮和绿藻结皮； [0009]Sp2： 制备培养基， 所述制备培养基为制作A、 B、 C、 D四种培养基， 且四种培养基分别 为PDA培养基、 MY培养基、 EMB培养基和BBM培养基； [0010]Sp3： 原料分离处理， 所述原料分离处理为对地衣结皮、 苔藓结皮和绿藻结皮取等 重量分别放入离心管中， 振荡洗涤10次， 2min/次， 吸干水分后 分别放置超净工作台用无菌 水振荡洗涤， 振荡洗涤3 0次， 3min/次； [0011]Sp4： 原料组合分类， 所述原料组合分类为取原料分离处理后的地衣结皮、 苔藓结 皮和绿藻结皮用无菌研磨棒磨碎， 经无菌擦镜纸过滤洗涤5次， 将原料等量分为三组， 依次 为地衣结皮和绿藻结皮、 地衣结皮和苔藓结皮、 苔藓结皮与绿藻结皮； [0012]Sp5： 组织培养， 所述组织培养为将组织分离中的地衣结皮和绿藻结皮、 地衣结皮 和苔藓结皮、 苔藓结皮与绿藻结皮 分别放置在A、 B、 C三种培 养基中培 养， 培养时间为7h；说　明　书 1/4 页 3 CN 115152561 A 3