(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210665360.8 (22)申请日 2022.06.14 (83)生物保 藏信息 GDMCC No: 62222 2022.01.13 (71)申请人 广东容大生物 股份有限公司 地址 511500 广东省清远市高新 技术产业 开发区建 设二路31号 申请人 广西大学 (72)发明人 黄炜乾　沈水宝　黄钦耿　方文棋　 林万华　廖莹　林波　 (74)专利代理 机构 广州高炬知识产权代理有限 公司 44376 专利代理师 王昌金 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)C12N 1/02(2006.01) A23K 10/18(2016.01) C12R 1/23(2006.01) (54)发明名称 一种含有肠源性益生菌的微生态制剂及其 制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种含有肠源性益生菌的微 生态制剂及其制备方法和应用， 本发 明的微生态 制剂中含有肠源性益生菌， 所述益生菌命名为嗜 酸乳杆菌LA18， 其发酵代谢产物中富含的乳酸菌 素能够对常见的致病菌的生长和繁殖产生抑制 和杀灭作用， 而且嗜酸乳杆菌LA18还具备温度、 酸碱以及蛋白酶稳定性， 有助于维护动物肠道微 生物群落平衡， 提高生产性能。 该微生态制剂的 制备方法， 包括如下步骤： 菌株的活化培养， 摇瓶 种子培养， 种子的扩大培养， 发酵罐培养， 喷雾干 燥， 即得到含有乳酸菌 素嗜酸乳杆菌LA18的微生 态制剂。 该微生态制剂用于动物养殖， 能有效保 证动物肠 道健康， 为 “饲料禁抗、 养殖减抗和食品 无抗”的防治提供新的思路。 权利要求书2页 说明书12页 序列表1页 CN 114806975 A 2022.07.29 CN 114806975 A 1.一种含有肠源性益生菌的微生态制剂， 其特征在于， 所述微生态制剂含有肠源性益 生菌， 所述肠源性益生菌株命名为嗜酸乳杆菌LA18， 保藏号为GDMCC  No: 62222， 保藏 日期 为2022年1月13 日， 保藏分类命名为嗜酸乳杆菌， 保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心， 保藏单位 地址为广东省广州市先烈中路10 0号大院59号楼5楼。 2.如权利要求1所述的含有肠源性益生菌的微生态制 剂， 其特征在于， 所述嗜酸乳杆菌 LA18的rDNA序列如SEQ  ID NO:1所示。 3.权利要求1或2所述的含有肠源性益生菌的微生态制剂的制备方法， 其特征在于， 包 括以下步骤： 1） 将所述嗜酸乳杆菌LA18菌株进行活性培 养； 2） 活化后的菌株进行摇瓶种子 培养， 得到摇瓶种子； 3） 将摇瓶种子移接 至种子培养基进行种子扩大培 养； 4） 将扩大培养后的种子移送至发酵罐培养， 得到发酵液后， 再进行喷雾干燥， 得到含有 肠源性益生菌的微 生态制剂。 4.如权利要求3所述的含有肠源性益生菌的微生态制 剂的制备方法， 其特征在于， 步骤 1） 中， 所述活化培养是采用MRS琼脂培养基对 所述嗜酸乳杆菌LA18 菌株斜面培养， 具体步骤 为： 接种甘油菌至MRS琼脂培养基平 皿， 培养箱中于35~37℃培养36~48h， 再用无菌生理盐水 洗下分生孢子， 转接 于MRS培养基， 于培养箱中35~37℃培养24~48h。 5.如权利要求3所述的含有肠源性益生菌的微生态制 剂的制备方法， 其特征在于， 步骤 2） 中， 所述摇瓶种子培养的具体步骤为： 将活化培养后的菌种， 加入 无菌生理盐水洗脱制备 菌悬液， 转接于装有MRS肉汤培养基的摇瓶中， 在转速为80~100r/min和温度为35~37℃的条 件下培养12~14h， 然后再在3 5~37℃下静置 培养12~24h。 6.如权利要求3所述的含有肠源性益生菌的微生态制 剂的制备方法， 其特征在于， 步骤 3） 中， 所述种子扩大培养的具体步骤为： 采用种子罐进 行摇瓶种子的扩 大培养， 种子摇瓶按 接种量2~10%移接含有种子培养基的种子罐； 其中， 罐压为0.05~0.1Mpa， 罐温为35~37℃， 搅 拌转速为100~150r/min， 溶氧为自然下降， 底糖选用质量浓度为5~10%的还原糖， 底糖的移 种量为10~20%， 培养周期为12~18h， 所述摇瓶种子的菌落数＞109cfu/mL。 7.如权利要求6所述的含有肠源性益生菌的微生态制 剂的制备方法， 其特征在于， 所述 种子培养基包括以下按重量百分比计的原料： 玉米淀粉1~2%、 蔗糖2~5%、 葡萄糖0.5~1.5%、 甘蔗糖蜜0.5~1%、 酵母膏0.5~2%、 乙酸钠0.5~1%、 柠檬酸氢二铵0.1~0.5%、 硫酸铵0.1~0.5%、 轻质碳酸钙0.5~1%、 硫酸镁0.01~0.05%、 硫酸锰0.001~0.005%、 吐温80  0.05~0.2%、 豆油0.1 ~0.2%， 由水补足 100%； 其中， 种子 培养基的pH为6.0~6.5。 8.如权利要求3所述的含有肠源性益生菌的微生态制 剂的制备方法， 其特征在于， 步骤 4） 中， 所述 发酵罐培养的具体步骤为： 扩大培养后的种子移种至发酵罐中的液体培养基内， 移种量为10~20%； 在发酵培养起始阶段， 控制发酵罐通气量为150~200mL/min， 搅拌转速为 100~200rpm， 温度为35~37℃， 初始还原糖的浓度为50~100g/L， 溶氧控制自然； 全过程通过 控制流加质量浓度为50~70%的葡萄糖水溶液， 维持发酵罐中的葡萄糖含量为0.5~1.0g/ 100mL再进行好氧发酵， 好氧发酵的周期为18~24h， 好氧发酵完成后关闭搅拌， 维持发酵罐 内正压， 再进行厌氧发酵12~18h， 停止发酵， 在发酵液中加入碳酸钙和脱脂米糠， 然后直接 进行喷雾 干燥， 出口温度120~130℃。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114806975 A 29.如权利要求8所述的含有肠源性益生菌的微生态制 剂的制备方法， 其特征在于， 所述 液体培养基按以下重量份百分计的原料： 黄豆饼粉4~5%、 玉米淀粉1~2%、 蔗糖1~3%、 葡萄糖 0.1~0.5%、 甘蔗糖蜜1~2%、 酵母膏1~2%、 柠檬酸氢二铵0.1~0.5%、 磷酸二氢钾0.1~0.2%、 乙酸 钠0.1~0.5%、 硫酸铵0.1~0.2%、 硫酸镁0.01~0.05%、 硫 酸锰0.001~0.005%， 加水补足100wt%； 再加入0.1~0.5mL/10 0mL的吐温80 。 10.如权利要求3所述的含有肠源性益生菌的微生态制剂的制备方法， 其特征在于， 所 述含有肠源性 益生菌的微 生态制剂在动物养殖 上的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114806975 A 3