(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210721828.0 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 大连益丰农生物科技有限公司 地址 116000 辽宁省大连市金普新区炮台 街道宫房村 (72)发明人 张大庆　佟晔　于放　俞志敏　 张洪铭　赵瑞清　 (74)专利代理 机构 洛阳谷丰专利代理事务所 (普通合伙) 41208 专利代理师 李亚南 (51)Int.Cl. A01N 63/22(2020.01) A01N 63/25(2020.01) A01N 25/28(2006.01) A01P 21/00(2006.01)A01C 1/06(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C12R 1/10(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种含有植物根际促生菌微胶囊的种衣剂 及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种含有植物根际促生菌微 胶囊的种衣剂及其制备方法， 包含以下质量百分 比原料： 促生菌微胶囊5～10％、 壳聚糖1～ 2.5％、 羟丙基甲基纤维素0.2～0.5％、 明胶1～ 4％、 交联剂0.1～ 0.5％和甘油1.5～2.5％， 其制 备方法包括以下步骤： (1)解淀粉芽孢杆菌、 地衣 芽孢杆菌和多粘类芽孢杆菌促生菌株活化； (2) 制备三株菌的种子 液； (3)制备三株菌混合菌泥； (4)制备促生菌微胶囊粉剂； (5)复配制备含促生 菌微胶囊的种衣剂。 本发明包裹在作物种子表 面， 可有效地提高了种子发芽率、 幼苗株高、 幼苗 鲜重， 促进了根系的生长， 增加了作物的产量， 也 可提高作物的对环境胁迫的耐受性， 包括耐旱、 耐寒、 耐重 金属、 耐盐碱等， 同时提高了作物抗病 害能力。 权利要求书1页 说明书6页 CN 115088732 A 2022.09.23 CN 115088732 A 1.一种含有植物根际促生菌微胶囊的种衣剂， 其特征在于： 包括有含有根际促生菌微 胶囊的种衣剂， 所述含有根际促生菌微胶 囊的种衣剂包含促生菌微胶 囊、 壳聚糖、 羟丙基甲 基纤维素、 明胶、 交联剂和甘油， 所述促生菌微胶 囊的平均直径 为10～200 μm， 所述的交联剂 为硼酸、 柠檬酸的一种或两种， 所述壳聚糖的平均分子量为100kDa～10000kDa， 脱乙酰度为 80％～95％， 所述羟丙基甲基纤维素的平均分子量为10kDa～30kDa， 所述促生菌微胶囊包 含促生菌、 明胶、 保护剂、 乳化剂、 羧甲基纤维素和固化剂， 所述乳化剂为蔗糖酯， 所述固化 剂为谷氨酰胺转氨酶， 所述保护剂为海藻糖， 所述的谷氨酰胺转氨酶为食品级固体粉末， 其 酶活力为10 0～1000U/g。 2.一种用于制备权利要求1所述的含有植物根际促生菌微胶囊的种衣剂的制备方法， 其特征在于， 包 含以下步骤： 步骤(1)、 菌株活化： 解淀粉芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌和多粘类芽孢杆菌分别划线接种 于固体活化培 养基， 25～3 5℃， 活化培 养24～36小时后， 得到活化菌， 备用； 步骤(2)、 种子液制备： 将步骤(1)中活化后的解淀粉芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌和多粘类 芽孢杆菌分别接种于种子培养基， 25～35℃， 150～200转/分钟摇床振荡培养18～36小时 后， 得到三株菌种子液， 备用； 步骤(3)、 发酵液制备： 将步骤(2)制备的解淀粉芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌和多粘类芽孢 杆菌分别按体积 接种量2.0～4.0％共同接种于发酵培养基， 25～35℃， 150～200转/分钟搅 拌发酵； 在发酵过程中， 持续通入无菌空气量1.5～3.0vvmin培养18～36小时后， 得到根际 促生菌发酵 液； 6000～10000转/分钟离心10～ 20分钟收集菌泥， 备用； 步骤(4)、 微胶囊制备： 将0.5～2.0质量份 的菌泥分散于0.5％～2％的明胶水溶液中， 并加入0.1～0.5质量份的海藻糖和2.5～3.5质量份的蔗 糖酯， 用5％乙酸溶液调节体系pH 值至3.5～4.5； 喷雾加入0.5～2.0％羧甲基纤维素溶液， 2500 ×g均质5分钟形成乳液， 40～ 60℃恒温10～30分钟， 用3％NaOH调节体系pH值至5.5～6.5， 添加1～5质量份的谷氨 酰胺转 氨酶， 经30～50℃恒温固化反应30～90分钟形成微胶囊溶剂， 经喷雾干燥得到促生菌微胶 囊粉剂。 步骤(5)、 种衣剂制备： 在1％乙酸溶液中分别添加1～2.5质量份的壳聚糖、 0.2～0.5质 量份的羟丙基甲基纤维素、 1.0～4.0质量份的明胶、 0.1～0.5质量份的交联剂， 在40～60℃ 恒温交联反应30～60分钟， 然后加入5～10质量份步骤(4)中所述的促生菌微胶囊粉剂和 1.5～2.5质量份的甘油， 搅拌均匀， 得到含促 生菌微胶囊的种衣剂。 3.根据权利要求2所述的用于制备含有促生菌微胶囊的种衣剂的制备方法， 其特征在 于： 所述步骤(3)中所述微生物 为解淀粉芽孢杆菌的菌体、 地衣芽孢杆菌的菌体和多粘类芽 孢杆菌的菌体的混合液时， 所述 微生物的总活菌浓度为1.0～5.0 ×109CFU/mL。 4.根据权利要求2所述的用于制备含有促生菌微胶囊的种 衣剂制备方法， 其特征在于： 所述步骤(4)中所述的明胶与羧甲基纤维素质量比为1:0.8～1.2。 5.根据权利要求2所述的用于制备含有促生菌微胶囊的种 衣剂制备方法， 其特征在于： 所述步骤(4)中所述喷雾 干燥的条件为进风温度为13 0～150℃， 出风温度为6 0～70℃。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115088732 A 2一种含有植物 根际促生菌微胶囊的种衣剂及其制备方 法 [0001]本发明涉及农业生产技术领域， 特别是涉及一种含有植物根际促生菌微胶囊的种 衣剂及其制备 方法。 背景技术 [0002]种子包衣是一项促进农业增产丰收的高新技术， 用种衣剂包过的种子播种后， 能 迅速吸水膨胀。 随着种子内胚胎的逐渐发育以及幼苗的不断生长， 种衣剂将含有的各种有 效成分缓慢地释放， 被种子幼苗逐步吸收到体内， 从而达到防治苗期病虫害、 促进生长发 育、 提高作物产量的目的。 [0003]植物益生菌种衣剂是以促生微生物为有效成分的一种新型种衣剂， 含有对作物有 益的微生物菌或菌群， 如固氮菌、 溶磷菌、 解钾等， 其目的一方面基于拮抗原理， 利用有益菌 抵抗有害病菌侵害和繁殖， 达到抗病的目的； 另一方面， 基于促生微生物分泌物， 对根际土 壤进行物质转化， 促进作物生长。 芽孢杆菌属是促进作物生长的根际细菌中的重要成员之 一， 其所需营养成分简单、 生长繁殖速度快、 适应性及抗逆性极强， 利于大量培养， 可以在 多 种植物组织中被分离， 筛选 分离， 芽孢杆菌能够分泌多种蛋白类和激素类活性物质， 天然 无 毒害， 并具有抗病抑菌、 提高作物抗 性、 促进作物生长及改良土壤的作用。 [0004]现有含植物益生菌的种衣剂存在的主要问题有： (1)针对性不足， 缺少特定作物的 精准性包衣剂， 微生物防治效果一般； (2)促生微生物活性易受外界环境影响， 当施用土壤 中微生物活性很低或失去活性； (3)包衣技术单一， 一般都是均一型包衣， 膜结构不稳定易 脱落， 导致活性成分损失， 降低种衣剂防治效果。 发明内容 [0005]本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种含有植物根际促生菌微胶囊 的种衣剂及其制备 方法。 [0006]本发明通过以下技 术方案来实现上述目的： [0007]一种含有植物根际促生菌微胶囊的种衣剂， 包括有含有根际促生菌微胶囊的种衣 剂， 所述含有根际促生菌微胶囊的种衣剂包含促生菌微胶囊、 壳聚糖、 羟丙基甲基纤维素、 明胶、 交联剂和甘油； [0008]所述的促生菌微胶囊的平均直径为10～200 μm， 所述的交联剂 为硼酸、 柠檬酸的一 种或两种； [0009]所述的壳聚糖的平均分子量为100kDa～10000kDa， 脱乙酰度为80％～95％， 所述 的羟丙基甲基纤维素的平均分子量 为10kDa～3 0kDa； [0010]所述的促 生菌微胶囊 包含促生菌、 明胶、 保护剂、 乳化剂、 羧甲基纤维素和固化剂； [0011]所述的乳化剂为蔗糖酯， 所述的固化剂为谷氨酰胺转氨酶； [0012]所述的保护剂为海藻糖； [0013]所述的谷氨酰胺转氨酶为食品级固体粉末， 其酶活力为10 0～1000U/g。 [0014]还包括有一种用于制备含有植物根际促生菌微胶囊的种衣剂的制备方法， 包含以说　明　书 1/6 页 3 CN 115088732 A 3