(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210728770.2 (22)申请日 2022.06.24 (83)生物保 藏信息 CCTCC No:M2022879 202 2.06.13 CCTCC No:M2022878 202 2.06.13 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 赵和平　巩文静　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 傅朝栋　张法高 (51)Int.Cl. C12N 11/084(2020.01) C12N 11/10(2006.01)C12N 11/14(2006.01) C12N 1/20(2006.01) B09C 1/10(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种可用 于电镀污染场地修复的固态菌剂 及其方法与应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于电镀污染场地修复 的固态菌剂及其方法与应用， 属于微生物修复技 术领域。 固态菌剂的制备方法包括将聚乙烯醇与 海藻酸钠粉末混合， 加入活性炭， 得到第二混合 溶液； 将含有微杆菌属(Microbacterium  sp.) Cr2203‑1和赖氨酸芽胞杆菌(Lysinibacillus   sp.)Cr2203 ‑2的铬还原菌剂与第二混合溶液混 合均匀， 随后于0 ‑4℃下滴入浓度为2 0‑50％的氯 化钙饱和硼酸溶液， 以包埋得到固态菌剂。 本发 明中的菌群具有高效的铬还原效率， 可以在24小 时内完全还原 50mg/L六价铬， 同时可以在镍(30 ‑ 50)mg/L、 铜(50 ‑100)mg/L的存在下不受影响地 进行六价铬还原。 用微生物去除环 境中的六价铬 具有成本低、 有效期长、 环境友好、 效果稳定等优 点， 适合长时间的处 理大量六价铬污染的环境。 权利要求书2页 说明书5页 附图3页 CN 115261372 A 2022.11.01 CN 115261372 A 1.一种可用于电镀 污染场地 修复的固态菌剂的制备 方法， 其特 征在于， 具体如下： 将完全溶解的聚乙烯醇与海藻酸钠粉末混合均匀， 得到第一混合溶液； 向第一混合溶 液中加入活性炭， 得到第二混合溶液； 将含有微杆菌属(Microbacterium  sp.)Cr2203 ‑1和 赖氨酸芽胞杆菌(Lysinibacillus  sp.)Cr2203 ‑2的铬还原菌剂按照(1 ‑2):10的体积比与 所述第二混合溶液混合均匀， 随后于0 ‑4℃下滴入浓度为20 ‑50％的氯化钙饱和硼酸溶液， 以包埋得到固态菌剂； 所述微杆菌属Cr2203 ‑1于2022年06月13日保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏号为 CCTCC No:M2022878； 所述赖氨酸芽胞杆菌Cr2203 ‑2于2022年06月13日保藏于 中国典型培 养物保藏中心， 保藏 号为CCTCC No:M2022879。 2.根据权利要求1所述的可用于电镀污染场地修复的固态菌剂的制备方法， 其特征在 于， 所述聚乙烯醇于70～80℃下以实现完全溶解。 3.根据权利要求1所述的可用于电镀污染场地修复的固态菌剂的制备方法， 其特征在 于， 所述聚乙烯醇与海藻酸钠粉末的质量比为1:(1 ‑5)。 4.根据权利要求1所述的可用于电镀污染场地修复的固态菌剂的制备方法， 其特征在 于， 所述第二混合溶 液中的活性炭浓度为3 ‑5g/L。 5.根据权利要求1所述的可用于电镀污染场地修复的固态菌剂的制备方法， 其特征在 于， 所述铬还原菌剂中微杆菌属Cr2203 ‑1的含量占比为3％～10.2％， 赖氨酸芽胞杆菌 Cr2203‑2的含量占比为62％～89.2％。 6.根据权利要求1所述的可用于电镀污染场地修复的固态菌剂的制备方法， 其特征在 于， 所述铬还原菌剂的制备 方法如下： S1： 将2g胰蛋白胨、 1g酵母提取物和2g氯化钠加入至200mL水中， 用HCl调节pH至7， 压力 升至103.4kPa， 于121.3℃温度下维持15～30分钟以高温高压灭菌， 配成细菌基础培养基； 在所述细菌基础培养基中加入0.17 ‑0.56g重铬酸钾， 制成含有300 ‑1000mg/L六价铬的含铬 培养基； S2： 以10‑40g:1L的比例向所述含铬培养基中添加电镀场地污染土壤， 于35℃和120rpm 的条件下培 养3天后取上清菌液， 得到初始接种源； S3： 将所述初始接种源接种至含有镍30 ‑50mg/L、 铜50 ‑100mg/L和六价铬50 ‑300mg/L的 细菌基础培养基中进行六价铬还原， 至菌群具有还原六价铬的功能且50 ‑300mg/L六价铬完 全被还原， 富 集得到铬还原菌剂。 7.一种利用权利要求1～6任一所述制备方法得到的可用于电镀污染场地修复的固态 菌剂。 8.一种利用权利要求7所述固态菌剂在处理污染土壤 中的应用， 其特征在于， 于35℃和 120rpm的条件下， 将含有50 ‑300mg/L六价铬 的污染土壤和固态菌剂加入细菌基础培养基 中。 9.一种利用权利要求7所述固态菌剂在处理污染土壤 中的应用， 其特征在于， 于35℃和 120rpm的条件下， 将 含有50‑300mg/L六价铬、 30 ‑50mg/L镍或50 ‑100mg/L铜的污染土壤和固 态菌剂加入细菌基础培 养基中。 10.根据权利要求8 或9所述固态菌剂在处理污染土壤中的应用， 其特征在于， 所述细菌 基础培养基的制备 方法如下：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115261372 A 2将2g胰蛋白胨、 1g酵母提取物和2g氯化钠加入至200mL水中， 用HCl调节pH至7， 压力升 至103.4kPa， 于121.3℃温度下维持15～3 0分钟以高温高压灭菌， 配成细菌基础培 养基。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115261372 A 3