(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210922372.4 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 北大方正集团有限公司 地址 100871 北京市海淀区成府路2 98号方 正大厦8层 申请人 北大医药重庆大新药业股份有限公 司　 北大医疗产业 集团有限公司 (72)发明人 赵子刚　张葵　金明义　 (74)专利代理 机构 北京同立钧成知识产权代理 有限公司 1 1205 专利代理师 孙静　臧建明 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 7/66(2006.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种发酵 方法及发酵生产辅酶Q10的方法 (57)摘要 本发明提供一种发酵方法及发酵生产辅酶 Q10的方法， 包括以下步骤， 前发酵： 在前发酵罐 中进行前发酵， 其中， 前发酵的初始发酵液体积 是前发酵罐容积的45％ ‑70％； 当前发酵进行到 (0.4n‑0.6n)小时， 前发酵罐中的发酵液体积因 补料增加至前发酵罐容积的75％ ‑85％时， 进行 分罐操作， 其中n(小时)为发酵周期； 分罐： 将前 发酵罐中发酵液体积的40％ ‑60％转入后发酵 罐； 后发酵： 分罐后， 前、 后发酵罐分别进行后发 酵， 当发酵液的体积因补料增加至前、 后发酵罐 容积的75％ ‑85％时， 停止发酵， 放罐。 采用上述 方法发酵生产辅酶Q10， 能够提高发酵罐的设备 利用率并提高发酵产量3 3％。 权利要求书2页 说明书10页 附图1页 CN 115125177 A 2022.09.30 CN 115125177 A 1.一种发酵 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 前发酵： 在前发酵罐中进行前发酵， 其中， 前发酵的初始发酵液体积是前发酵罐容积的 45％‑70％； 当前发酵进行到(0.4n ‑0.6n)小时， 前发酵罐中的发酵液体积因补料增加至前 发酵罐容积的75％ ‑85％时， 进行分罐操作， 其中n(小时)为发酵周期； 分罐： 将前发酵 罐中发酵 液体积的40％ ‑60％转入后发酵 罐； 后发酵： 分罐后， 前、 后发酵罐分别进行后发酵， 当发酵液的体积因补料增加至前、 后发 酵罐容积的75％ ‑85％时， 停止发酵， 放罐。 2.根据权利要求1所述的发酵方法， 其特征在于， 将三个发酵罐搭配为一组， 所述前发 酵罐的数量为两个， 所述后发酵罐的数量为一个， 两个前发酵罐以间隔时间为(0.4n ‑0.6n) 小时交替连续进行 所述前发酵， 一个后发酵 罐交替承接 两个前发酵 罐的分罐操作。 3.根据权利要求1或2所述的发酵方法， 其特征在于， 在 分罐阶段， 将前发酵罐中发酵液 体积的50％转入后发酵 罐。 4.一种发酵生产辅酶Q10的方法， 其特征在于， 采用权利要求1 ‑3任一项所述的发酵方 法。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 前发酵、 后发酵阶段的发酵参数均为： 温度 30℃‑34℃， 罐压 0.03Mpa‑0.06Mpa， 通气量0.5v vm‑1.0vvm， 搅拌转速 60rpm‑150rpm。 6.根据权利要求4或5所述的方法， 其特征在于， 前发酵阶段和后发酵阶段， 均进行补料 发酵培养， 包括： 向发酵液中持续补加葡萄糖溶液， 维持发酵液中葡萄糖浓度为5g/L ‑20g/L， 所述葡萄 糖溶液的浓度为 45％‑65％； 和/或， 向发酵液中持续补加氨水， 维持发酵液pH为6.5 ‑7.1， 所述氨水的浓度为22％ ‑28％； 和/或， 向发酵液中持续补加磷酸二氢钾溶液， 维持发酵液的磷含量为60ppm ‑140ppm， 所述磷 酸二氢钾溶 液的浓度为10％ ‑20％。 7.根据权利要求4 ‑6任一项所述的方法， 其特征在于， 在前发酵之前， 还包括种子扩大 培养， 所述种子扩大培 养包括种子摇瓶培 养、 一级种子罐扩大培 养和二级种子罐扩大培 养； 所述种子摇瓶培 养包括以下步骤： 按照0.1％ ‑0.2％的接种量将菌种接入到种子摇瓶中进行培养， 培养温度为30℃ ‑34 ℃， 转速为20 0rpm‑250rpm， 培养时间为2 2h‑28h， 得到摇瓶种子液； 所述一级种子罐扩大培 养包括以下步骤： 按照0.1％ ‑0.2％的接种量将摇瓶种子液接入一级种子罐中进行培养， 培养温度为30 ℃‑34℃， 通气量为0.5vvm ‑1vvm， 罐压为0.03Mpa ‑0.06Mpa， 转速为150rpm ‑250rpm， 培养时 间为24h‑36h， 得到一级种子液； 所述二级种子罐扩大培 养包括以下步骤： 按照2％‑15％的接种量将一级种子罐的一级种子液接入二级种子罐中进行培养， 培养 温度为30 ‑34℃， 通气量为0.6vvm ‑1.2vvm， 罐压为0.03Mpa ‑0.06Mpa， 转速为100rpm ‑ 200rpm， 培养时间为16 h‑28h， 得到二级种子液。 8.根据权利要求7 所述的方法， 其特 征在于， 控制所述摇瓶种子液的OD600为4‑6； 和/或， 控制所述 一级种子液的OD600为4‑6； 和/或，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115125177 A 2控制所述 二级种子液的OD600为9‑11。 9.根据权利 要求7或8所述的方法， 其特征在于， 按照10 ％‑30％的接种量将所述二级种 子液接入所述前发酵 罐中进行 前发酵。 10.根据权利要求4 ‑9任一项所述的方法， 其特征在于， 采用的发酵菌种为类球红细菌 (Rhodobacter  sphaeroides)ATC C 21286。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115125177 A 3