(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210778243.2 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 哈尔滨韶创生物科技有限公司 地址 150000 黑龙江省哈尔滨市香坊区黎 明街道办事处哈阿公路7公里1栋1-2 层 (72)发明人 王希国　 (74)专利代理 机构 沈阳天赢专利代理有限公司 21251 专利代理师 孙万玲 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/18(2006.01) A23K 10/18(2016.01) A23K 50/10(2016.01)C12R 1/865(2006.01) C12R 1/25(2006.01) C12R 1/23(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种反刍专用液态复合微生态制剂及其制 备方法 (57)摘要 本发明涉及一种反刍专用液态复合微生态 制剂， 包括以下重量百分比的原料： 屎肠球菌 20％、 植物乳 杆菌15％、 嗜酸乳杆菌15％、 枯草芽 孢杆菌20％、 普利菌 ‑7 15％和酿酒酵母15％。 该 反刍专用液态复合微生态制剂及其制备方法， 在 反刍动物胃肠道内， 枯草芽抱杆菌的芽抱、 酿酒 酵母和普利菌 ‑7能够迅速萌发， 繁殖， 消耗肠内 氧气， 抑制有害菌的生长， 从而保护何促进益生 菌的生长， 以维护肠道微生态平衡， 屎肠球菌、 植 物乳杆菌和嗜酸乳杆菌繁殖能力强， 可耐受胃酸 及肠道胆盐高渗透压环境， 且粘附能力强， 可在 肠道定植发挥 益生作用， 可调节和改善微生物菌 群的比例， 本发明中采用的微生物菌种抗逆性 强， 可定植于 畜禽肠道， 具有很强的蛋白酶、 脂肪 酶、 淀粉酶活性。 权利要求书3页 说明书6页 CN 114908026 A 2022.08.16 CN 114908026 A 1.一种反刍专用液态复合微生态制剂， 其特征在于， 包括以下重量百分比的原料： 屎肠 球菌20％、 植物乳杆菌15％、 嗜酸乳杆菌15％、 枯草芽孢杆菌20％、 普利菌 ‑7 15％和酿酒酵 母15％。 2.一种反刍专用液态复合 微生态制剂的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)准备好制备需要的工具和机 械等， 再按一定比例称取原料 备用； 2)在150ML‑250ML的发酵 罐中装入50ML‑100ML的微生物液体培 养基备用； 3)按照一定百分比的接种量在发酵罐中的微生物液体培养基中接入屎肠球菌， 植物乳 杆菌， 嗜酸乳杆菌， 枯草芽孢杆菌， 普利菌 ‑7和酿酒酵母， 再分别放于恒温培养箱中培养一 定时间得到一级菌剂； 4)将每个材料制得的一级菌剂按无菌操作分别接入一定量的无菌改良MRS培养基中， 并按一定的接种量， 在 恒温箱内培 养一定时间， 可 得到活菌数为 一定量的二级菌剂； 5)将每个材料制得的二级菌剂按无菌操作分别接入一定量的无菌改良MRS培养基中， 并按一定的接种量， 在恒温箱内培养一定时间， 即可得到活菌数为一定量的液态高密度培 养液； 6)分别将将屎肠球菌、 植物乳杆菌、 嗜酸乳杆菌、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母和普利菌 ‑7 的液态高密度培 养液以4︰ 3︰ 3︰ 4︰ 3︰ 3比例进行配比， 再真空包 装即可得到最终菌剂。 3.根据权利要求2所述的一种反刍专用液态复合微生态制 剂的制备方法， 其特征在于： 所述屎肠球菌 菌剂的制备 方法如下： ①所述屎肠球菌 外购， 经筛 选纯化获得优良纯种菌株； ②一级菌剂——将活化斜面菌种接种于装有50ML无菌改良MRS培养基的锥形瓶中， 锥 形瓶容积为15 0ML， 放于37℃恒温震荡培 养箱中培 养24h， 转速为5 0rpm； ③二级菌剂——将一级菌液按无菌操作接入5L无菌改良MRS培养基中， 接种量为3％， 37℃恒温好氧培 养16h， 搅拌转速10 0rpm， 活菌数为≧1 ×1010CFU/ML； ④发酵罐扩大培养——将二级菌液按无菌操作接入200L无菌改良MRS培养基中， 接种 量为3％， 37℃恒温培 养16h， 转速为10 0rpm， 活菌数为≧1 ×1010CFU/ML； ⑤所述屎肠球菌液态培养的改良MRS培养基为： 葡萄糖2％， 蛋白胨1％， 牛肉膏1％， 酵 母浸粉0.5％， 乙酸钠0.5％， 磷酸氢二钾0.2 ％， 柠檬酸氢二铵2 ％， 硫酸镁0.058％， 硫酸锰 0.025％， 碳 酸钙1％， 吐温80  0.1％， pH值7.0 ±0.2。 4.根据权利要求2所述的一种反刍专用液态复合微生态制 剂的制备方法， 其特征在于： 所述植物乳杆菌 菌剂的制备 方法如下： ①所述植物乳杆菌 外购， 经筛 选纯化获得优良纯种菌株； ②一级菌剂——将活化斜面菌种接种于装有50ML无菌改良MRS培养基的锥形瓶中， 锥 形瓶容积为25 0ML， 放于37℃恒温静止 培养24h； ③二级菌剂——将一级菌液按无菌操作接入200ML无菌改良MRS培养基中， 接种量为 2％， 37℃恒温静止 培养18h， 活菌数为≧1 ×109CFU/ML； ④发酵罐扩大培养——将二级菌液按无菌操作接入200L无菌改良MRS培养基中， 接种 量为3％， 37℃恒温静止24h， 活菌数为≧1 ×109CFU/ML； ⑤所述植物乳杆菌液态培养的优化MRS培养基为： 葡萄糖2％， 蛋白胨1％， 牛肉膏1％， 酵母浸粉0.5％， 乙酸钠0.5％， 磷酸氢二钾0.2 ％， 柠檬酸氢二铵2 ％， 硫酸镁0.058％， 硫酸权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114908026 A 2锰0.025％， 吐温80  0.1％， pH值7.0 ±0.2。 5.根据权利要求2所述的一种反刍专用液态复合微生态制 剂的制备方法， 其特征在于： 所述嗜酸乳杆菌 菌剂的制备 方法如下： ①所述嗜酸乳杆菌 外购， 经筛 选纯化获得优良纯种菌株； ②一级菌剂——将活化斜面菌种接种于装有50ML无菌改良MRS培养基的锥形瓶中， 锥 形瓶容积为25 0ML， 放于37℃恒温震荡培 养箱中培 养24h， 转速为20 0rpm； ③二级菌剂——将一级菌液按无菌操作接入500ML无菌改良MRS培养基中， 接种量为 2％， 37℃恒温好氧培 养18h， 搅拌转速20 0rpm， 活菌数为≧1 ×109CFU/ML； ④发酵罐扩大培养——将二级菌液按无菌操作接入200L无菌改良MRS培养基中， 接种 量为3％， 37℃恒温好氧培 养24h， 转速为20 0rpm， 活菌数为≧1 ×109CFU/ML； ⑤所述植物乳杆菌液态培养的改良MRS培养基为： 葡萄糖2％， 蛋白胨1％， 牛肉膏1％， 酵母浸粉0.5％， 乙酸钠0.5％， 磷酸氢二钾0.2 ％， 柠檬酸氢二铵2 ％， 硫酸镁0.058％， 硫酸 锰0.025％， 吐温80  0.1％， pH值7.0 ±0.2。 6.根据权利要求2所述的一种反刍专用液态复合微生态制 剂的制备方法， 其特征在于： 所述枯草芽孢杆菌 菌剂的制备 方法如下： ①所述枯草芽孢杆菌 外购， 经筛 选纯化获得优良纯种菌株； ②一级菌剂——将活化斜面菌种接种于装有50ML无菌改良MRS培养基的锥形瓶中， 锥 形瓶容积为25 0ML， 放于37℃恒温震荡培 养箱中培 养24h， 转速为20 0rpm； ③二级菌剂——将一级菌液按无菌操作接入10L无菌改良MRS培养基中， 接种量为4％， 37℃恒温好氧培 养16h， 搅拌转速20 0rpm， 活菌数为≧ 5×109CFU/ML； ④发酵罐扩大培养——将二级菌液按无菌操作接入200L无菌改良MRS培养基中， 接种 量为4％， 37℃恒温好氧培 养48h， 转速为20 0rpm， 活菌数为≧ 5×109CFU/ML； ⑤所述枯草芽孢杆菌液态培养的优化MRS培养基为： 葡萄糖1％， 蛋白胨1％， 牛肉膏 1％， 酵母浸粉0.5％， 乙酸钠0.5％， 磷酸氢二钾0.2％， 柠檬酸氢二铵2％， 硫酸镁0.058％， 硫酸锰0.025％， 麦麸3％， 吐温80  0.1％， pH值7.0 ±0.2。 7.根据权利要求2所述的一种反刍专用液态复合微生态制 剂的制备方法， 其特征在于： 所述酿酒酵母菌剂的制备 方法如下： ①所述酿酒酵母外购， 经筛 选纯化获得优良纯种菌株； ②一级菌剂——将活化斜面菌种接种于装有100ML无菌改良MRS培养基的锥形瓶中， 锥 形瓶容积为25 0ML， 放于37℃恒温震荡培 养箱中培 养24h， 转速为15 0rpm； ③二级菌剂——将一级菌液按无菌操作接入1L无菌改良MRS培养基中， 接种量为3％， 37℃恒温好氧培 养24h， 搅拌转速15 0rpm， 活菌数为≧1 ×109CFU/ML； ④发酵罐扩大培养——将二级菌液按无菌操作接入200L无菌改良MRS培养基中， 接种 量为2％， 37℃恒温好氧培 养24h， 转速为15 0rpm， 活菌数为≧1 ×109CFU/ML； ⑤所述酿酒酵母液态培养的优化MRS培养基为： 葡萄糖2％， 蛋白胨1％， 牛肉膏1％， 酵 母浸粉0.5％， 乙酸钠0.5％， 磷酸氢二钾0.2 ％， 柠檬酸氢二铵2 ％， 硫酸镁0.058％， 硫酸锰 0.025％， 吐温80  0.1％， pH值7.0 ±0.2。 8.根据权利要求2所述的一种反刍专用液态复合微生态制 剂的制备方法， 其特征在于： 所述普利菌 ‑7菌剂的制备 方法如下