(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210764938.5 (22)申请日 2022.07.01 (71)申请人 中科华启 （北京） 生物技 术研究院有 限公司 地址 100086 北京市海淀区西三 旗安宁庄 路4号9号楼4层098 8 (72)发明人 陈江　孔英俊　柳媛媛　 (74)专利代理 机构 北京天盾知识产权代理有限 公司 11421 专利代理师 姜有保 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12N 1/02(2006.01) C12N 1/06(2006.01)C12P 1/04(2006.01) A61K 8/99(2017.01) A61Q 19/00(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种双歧杆菌酶解溶胞产物及其制备工艺 与应用 (57)摘要 本发明公开了双歧杆菌酶解溶胞产物及其 制备工艺与应用， 采用固态发酵法制备燕麦培养 基； 筛选具有抗氧化活性的多个双歧杆菌菌种， 分别接种于所述燕麦培养基中发酵， 获得每一双 歧杆菌菌种的种子液； 配置培养基， 将获得的多 个双歧杆菌菌种的种子液中的某一菌种或某两 菌种的种子液在培养基中进行接种， 经一次发 酵， 获得一次发酵产物； 向一次发酵产物中加入 营养物质及与用于一次发酵相同的种子液后进 行二次发酵， 获得二次发酵产物； 将二次发酵产 物离心， 过滤， 高压均质裂解获得双歧杆菌溶胞 液和细胞壁碎片； 将获得的细胞壁碎片进行酶解 处理， 离心， 过滤， 获得细胞碎片酶解液； 将所述 双歧杆菌溶胞液和细胞碎片酶解液复配获得所 述双歧杆菌酶解溶胞产物。 权利要求书2页 说明书7页 附图2页 CN 115074285 A 2022.09.20 CN 115074285 A 1.一种双歧杆菌酶解溶胞产物， 其特征在于， 所述双歧杆菌酶解溶胞产物由下述方法 制备得到： 采用固态发酵法制备燕麦 培养基； 筛选具有抗氧化活性的多个双歧杆菌菌种， 分别接种于所述燕麦培养基中进行发酵， 获得每一种双歧杆菌 菌种的种子液； 配置培养基， 将 获得的多个双歧杆菌菌种的种子液中的某一菌种或某两菌种的种子液 在培养基中进行接种， 经一次发酵， 获得一次发酵产物； 向一次发酵产物中加入营养物质及与用于一 次发酵相同的种子液后进行二 次发酵， 获 得二次发酵产物； 将二次发酵产物离心， 过 滤， 高压均质裂解获得双歧杆菌溶 胞液和细胞壁碎片； 将获得的细胞壁碎片进行酶解处 理， 离心， 过 滤， 获得细胞碎片酶解液； 将所述双歧杆菌溶 胞液和细胞碎片酶解液复配获得 所述双歧杆菌酶解溶 胞产物。 2.根据权利要求1所述的双歧杆菌酶解溶胞产物， 其特征在于， 所述固态发酵法制备燕 麦培养基步骤如下： 将燕麦脱皮置于95 ‑100℃去离子水中浸煮， 捞出冷却， 加入酵母菌混合均匀， 撒白糖进 行固态发酵获得固态发酵产物； 将固态发酵产物粉碎， 加入去离子水， 保温， 搅拌， 过筛得滤液， 向滤液中加入葡萄糖、 琼脂搅拌均匀获得燕麦 培养基。 3.根据权利要求1所述的双歧杆菌酶解溶胞产物， 其特征在于， 所述细胞碎片 酶解液获 得步骤如下： 向高压均质裂解获得的细胞壁碎片中加入酶进行酶解处理， 调节PH值至8～8.5， 水浴 温度52～58℃， 加热时间3～4小时； 然后将上述反应置 于水浴温度90～ 95℃， 加热15～ 20min进行酶灭活； 灭活后置 于冰箱冷藏， 离心， 分离出 上清液为细胞碎片酶解液。 4.根据权利要求1所述的双歧杆菌酶解溶胞产物， 其特征在于， 所述将 获得的细胞壁碎 片进行酶解处 理中使用的酶为糖苷水解酶和下述酶中的一种： Alcalase碱性蛋白酶， 动物蛋白酶、 植物蛋白酶和微 生物蛋白酶。 5.根据权利要求1所述的双歧杆菌酶解溶胞产物， 其特征在于， 所述双歧杆菌菌种包括 青春双歧杆菌、 动物双歧杆菌、 短双歧杆菌、 及长双歧杆菌和嗜热双歧杆菌中的一种或两 种。 6.根据权利要求1所述的双歧杆菌酶解溶胞产物， 其特征在于， 所述将 获得的多个双歧 杆菌菌种的种子液中的某一菌种或某两菌种的种子液在培养基中进行接种中的培养基以 培养基总重计， 由如下质量百分含量的组分组成： 燕麦培养基40～80wt％、 复合维生素0.1～0.2wt％、 尿素0.1～0.2wt％， 余量为种子 液。 7.根据权利要求1所述的双歧杆菌酶解溶胞产物， 其特征在于， 所述向一 次发酵产物中 加入营养物质包括葡萄糖和水苏糖， 以一次发酵产物的总重计， 向一次发酵产物中加入葡 萄糖的质量百分含量 为0.5～2wt％； 加入水 苏糖的质量百分含量 为0.05～0.1wt％。 8.根据权利要求1所述的双歧杆菌酶解溶胞产物， 其特征在于， 所述一 次发酵产物中总权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115074285 A 2糖含量为0.5wt％以下， pH值在4.5以下； 所述 二次发酵产物中pH值在4.5以上。 9.根据权利要求1所述的双歧杆菌酶解溶胞产物， 其特征在于， 所述双歧杆菌溶胞液和 细胞碎片酶解液复配获得所述双歧杆菌酶解溶胞产物的步骤包括： 向双歧杆菌溶胞液和细 胞碎片酶解液混合液体中加入对羟基苯乙酮和已二醇、 戊二醇和甲基丙二醇中的一种或几 种。 10.如权利要求1至9任一项所述的双歧杆菌酶解溶 胞产物在制备化妆品中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115074285 A 3