(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210613942.1 (22)申请日 2022.05.31 (83)生物保 藏信息 GDMCC No： 62388 2022.04.14 (71)申请人 中国科学院广州地球化学研究所 地址 510640 广东省广州市天河区科华 街 511号 (72)发明人 罗春玲　李继兵　赵轩　杨秀敏　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 刘明星　陈洁娣 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 11/14(2006.01) C12N 11/10(2006.01)C12N 11/084(2020.01) C02F 3/34(2006.01) B09C 1/10(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C02F 101/32(2006.01) (54)发明名称 一种原位PA Hs降解功能菌LJB-135及其菌剂 和应用 (57)摘要 本发明公开了一种原位PAHs降解功能菌 L J B‑1 3 5 及 其 菌 剂 和 应 用 。该 菌 株 为 Marinobacter  sp.LJB‑135， 保藏于广东省微生 物菌种保藏中心， 保藏号为GDMCC  No:62388。 实 验证明菌株LJB ‑135能够利用菲作为唯一碳源并 且很快地降解菲； 在菲初始浓度为100mg/L的无 机盐培养基中培养3天后， 降解率为56.1 ％； 将该 菌制备成菌剂后其降解率可达到73.1％。 因此， 该菌株在多环芳烃污染环境的生物修复方面具 有较好的应用潜力。 权利要求书1页 说明书9页 序列表1页 附图2页 CN 114958670 A 2022.08.30 CN 114958670 A 1.Marinobacter sp.LJB‑135， 其保藏编号 为： GDMCC No:62388。 2.权利要求1所述的Mari nobacter sp.LJB‑135在降解多环芳烃中的应用。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述的降解多环芳烃是降解土壤或污水中 的多环芳烃。 4.根据权利要求2所述的应用， 其特 征在于， 所述的多环芳烃 是菲。 5.权利要求1所述的Mari nobacter sp.LJB‑135在制备多环芳烃降解菌剂中的应用。 6.一种多环芳烃降解菌剂， 其特征在于， 包含权利要求1所述的Marinobacter  sp.LJB‑ 135作为活性成分。 7.权利要求1所述的Marinobacter  sp.LJB‑135或权利要求6所述的菌剂在多环芳烃污 染环境的生物修复中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述的多环芳烃污染环境包括多环芳烃污 染水体和/或土壤。 9.一种降解多环芳烃的方法， 其特征在于， 将权利要求1所述的Marinobacter  sp.LJB‑ 135或权利要求6所述的菌剂洒于含有 多环芳烃的环境中， 对多环芳烃进行降解。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958670 A 2一种原位PAHs降解功能菌LJB ‑135及其菌剂 和应用 技术领域 [0001]本发明涉及微生物技术领域， 具体涉及一种原位PAHs降解功能菌LJB ‑135及其菌 剂和应用。 背景技术 [0002]多环芳烃是一类环境污染物， 普遍存在于土壤和水体当中， 能够对生态环境和人 类健康构成重大危害。 常见的PAHs包括16类物质， 其中， 菲常被作为PAH模式化合物用于 PAHs生物降解研究。 主要原因是由于其独特的化学结构， 以及其具有持久性、 致癌、 致畸、 致 突变性及生物累积性 等特性。 [0003]微生物可以降解环境中的PAHs从而达到修复的目的。 为了探索PAHs在环境中的归 宿， 一些基于培养的鉴定方法能够识别和分离能够单独降解它们的微生物。 至今， 已经分离 出许多能降解PAHs的功能微生物， 大多都是来自于Paenibacillus、 Burkholderia、 Stenotrophomonas、 Mycobacterium、 Sphingomonas等属的菌株。 这种依赖纯培养方法为确 定降解菌种类、 功能基因及代谢特征提供了线索。 然而， 在实际环境中， 只有少数污染物功 能降解菌可以被分离出来； 并且， 分离得到的功能微生物 能否在自然生境中发挥作用仍然 是值得怀疑的。 由于自然环境中存在的大多 数微生物是不可被培养的， 此外， 该方法大大低 估了原核微生物多样性， 不能解释在自然环境中微生物群落内个体之间复杂的相互作用， 同时也不能反映污染环境中功能微生物对污染物降解的真实情况。 因此， 很难利用实验室 培养发来揭示原位土著微生物的生态功 能。 相反， 利用不可培养法可以不需要通过实验室 培养来评估功能微 生物的代谢反应， 并直接将它 们的特性与自然生 境中的功能联系起 来。 [0004]稳定同位素探针(S IP)技术能够将稳定同位素标记技术和分子生物学手段如高通 量测序、 TRFLP等相结合， 通过向环境样品中加入稳定性同位素标记的目标化合物(13C或 15N)， 运用分子生物学手段对被稳定性同位素标记的生物标志物(如DNA、 RNA等)进行分析， 可以确定环境样品中的具有降解功能的微生物。 该技术可以跳过分离培养这一要求， 直接 将微生物群落和功能相联系。 目前， 应用SIP技术已经成功鉴定出多种PAHs降解功能菌， 但 是很少有研究人员通过分离培养方式成功地将其分离出来， 因此我们无法对该类菌株进 行 应用。 因此， 本研究以菲为目标化合物， 利用SIP 探查出PAH s降解微生物， 根据鉴定出的功能 菌的亲缘关系等消息， 设置培养基， 筛选出具有原 位降解PAH s功能的微生物， 以期为 菲及其 它多环芳烃的生物处 理提供数据支持。 发明内容 [0005]本发明的第一个目的是提供一株具有多环芳烃降解功能的Marinobacter   sp.LJB‑135。 该菌株于2022年4月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)， 地址： 广 东省广州市先烈中路10 0号大院59号楼5楼， 邮编： 510 070， 保藏编号 为： GDMCC No： 62388。 [0006]本研究报道菌株为Marinobacter  sp.LJB‑135， 是在2021年在东营石油污染场地 中分离并鉴定的新型海杆菌属的菌株， 但关于该菌株对PAHs降解研究国内外还未见报道。说　明　书 1/9 页 3 CN 114958670 A 3