(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210795818.1 (22)申请日 2022.07.07 (71)申请人 嘉兴启欣生态科技有限公司 地址 314033 浙江省嘉兴 市经济技 术开发 区御香苑1幢6 01室-1 申请人 嘉兴学院 (72)发明人 胡长伟　欧栋　孙诗清　李溪　 (74)专利代理 机构 南京中擎科智知识产权代理 事务所(普通 合伙) 32549 专利代理师 洪黎 (51)Int.Cl. C12N 1/36(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C02F 3/28(2006.01) C02F 3/34(2006.01)C12R 1/01(2006.01) C02F 101/16(2006.01) (54)发明名称 一种厌氧氨氧化菌的富 集培养方法 (57)摘要 本发明公开了一种厌氧氨氧化菌的富集培 养方法， 以含氨氧化菌的活性污泥作为接种物， 以高盐废水作为培养液， 分阶段进行富集培养， 具体包括： （1） 配制厌氧氨氧化菌的培养基并置 于厌氧反应器中， 从具有硝化 ‑反硝化功能的污 泥中提取厌氧氨氧化菌并将其接种于厌氧反应 器中， 添加.01~0.05%赤霉素以及0.01~0.03%红 霉素并调节 体系的pH值至7.0 ‑8.0， 并在30~40℃ 进行厌氧反应12~24h， 得到菌 液； （2） 以高盐废水 作为营养剂， 并将菌液接种到厌氧反应器中进行 菌种驯化， 在温度36~38℃， pH 8~9， 厌氧反应器 的水力停留时间6~8h， 期间每隔2~4天添加对应 浓度的高盐废水， 通过电镜观 察污泥中细菌细胞 结构， 经16S  rDNA鉴定其为厌氧氨氧化菌。 本发 明的方法可得到耐盐的厌氧氨氧化菌 。 权利要求书1页 说明书5页 CN 115058379 A 2022.09.16 CN 115058379 A 1.一种厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 所述方法是以含氨氧化菌的活性污泥作为接种 物， 以高盐废水作为培 养液， 分阶段进行富 集培养， 具体包括以下步骤： （1） 配制厌氧氨氧化菌的培养基并置于厌氧反应器中， 从具有硝化 ‑反硝化功能的污泥 中提取厌氧氨氧化菌并将其接种于厌氧反应器中， 添加0.01~0.05%赤霉素以及0.01~0.03% 红霉素并调节体系的pH值至7.0 ‑8.0， 并在3 0~40℃进行厌氧反应12~24h， 得到 菌液； （2） 配制不同浓度的高盐废水作为营养剂， 并将上述得到的菌液接种到厌氧反应器中 进行菌种驯化， 在每种浓度下驯化时， 其条件均为反应温度36~38℃， pH 8~9， 厌氧反应器的 水力停留时间6~8h， 期间每隔2~4天添加对应浓度的高盐废水， 经驯化后， 通过电镜观察污 泥中细菌细胞结构， 发现其细胞壁表面具有类菌毛状结构， 经16S  rDNA鉴定其为厌氧氨氧 化菌。 2.根据权利要求1所述的厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 其中， 所述步骤 （1） 中所述培 养基成分为： KHCO3： 1.75～2.55g/L； KCl： 0.01～0.015g/L； KH2PO4： 0.004～0.006g/L； VC： 0.01~0.02g/L； CaCl2： 0.6～0.9g/L； MgSO4·7H2O： 0.3～0.5g/L； FeSO4·7H2O： 0.015～ 0.025g/L； NaCl： 0.015～0.018g/L和2mL 微量元素。 3.根据权利要求2所述的厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 其中， 所述微量元素的成分 为： MnCl2·4H2O： 400~600mg/L； EDTA： 1500mg/L； ZnSO4·7H2O： 200~400mg/L； CuCl2： 125~ 225mg/L； CoCl2·6H2O： 120~225mg/L； NaMoO4·2H2O： 100~200mg/L； Na2SeO4： 100~110mg/L； NiCl2·2H2O： 125~155mg/L； H3BO4： 20~25mg/L。 4.根据权利要求1所述的厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 其中， 所述步骤 （1） 中所述具 有硝化‑反硝化功能的污泥为取自城市污水处 理厂的好氧活性污泥。 5.根据权利要求1所述的厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 其中， 所述步骤 （1） 中所述赤 霉素为GA3， 所述赤霉素的浓度为2~4mg/L； 所述红霉素的浓度为1~3mg/L。 6.根据权利要求1所述的厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 其中， 所述步骤 （2） 中所述高 盐废水取自工厂排出的废水， 并按照1倍、 2倍、 4 倍、 10倍、 20倍、 3 0倍进行稀释。 7.根据权利要求1所述的厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 其中， 所述步骤 （2） 中所述营 养剂中还包括促进剂， 所述促进剂包含以下重量百分数的物质： 多胺类物质40~60%、 无机酸 羟胺5~10%和Na2SO330~50%。 8.根据权利要求7所述的厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 其中， 所述多胺类物质选自精 胺、 亚精胺或其混合物。 9.根据权利要求7所述的厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 其中， 所述无机酸羟胺为盐酸 羟胺、 硫酸羟胺、 磷酸羟胺中的一种或其混合物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058379 A 2一种厌氧氨氧化 菌的富集培养方 法 技术领域 [0001]本发明属于微 生物培养技术领域， 具体涉及一种厌氧氨氧化菌的富 集培养方法。 背景技术 [0002]参与厌氧氨氧化过程的细菌称为厌氧氨氧化菌， 厌氧氨氧化菌(anaerobic   ammonium  oxidation,  Anammox)是一类细菌， 属于浮霉菌门， “红菌”是业内对厌氧氨氧化 菌的俗称， 通过生物化学反应， 它们可以将污水中所含有的氨氮转化为氮气去除。 它们对全 球氮循环具有重要意 义， 也是污水处 理中重要的细菌 。 [0003]在厌氧环境中， 厌氧氨氧化菌(Anammox)以CO2为碳源， 以NO2‑为电子受体， NH4+为电 子供体， 将铵离子  (NH4+)用亚硝酸根(NO2‑)氧化为氮气N2， 厌氧氨氧化反应是将NO2‑‑N和NH4 +‑N永久性脱离生态系统的有效途径。 厌氧氨氧化菌(Anammox)的厌氧氨氧化过程大大缩短 了氨氮氧化还原到氮气的过程， 从而减少 了生物脱氮的物质、 能量耗费， 占地面积小， 为生 物脱氮技 术的进步 提供了新的发展平台。 [0004]高盐废水主要来自于食品加工、 制药、 石油天然气加工、 制革、 榨菜腌制、 沿海地区 海水利用直接排放的污水等。 人们生活质量不断提高的同时也造成了高盐废水的排放呈现 逐年增加的趋势， 这些废水如果直接排放将导致江河水质矿化度提高， 给土壤、 地表水、 地 下水带来严重的污染， 进而危及生态环境。 由于高盐度会使微生物细胞的渗透压失调， 对微 生物的细胞壁和酶系统造成破坏， 进而导致微生物活性降低或死亡。 因此， 高盐一直是污水 生物处理亟需解决的棘手问题。 [0005]厌氧氨氧化作为新一代生物脱氮技术， 既不需要额外投加电子供体， 也不需要曝 气充氧， 与其他技术相比， 运行成本优势显著。 因此， 厌氧氨氧化具有广阔的应用前景。 但是 厌氧氨氧化技术也存在一些不足， 耐受冲击能力较弱， 例如废水中含有高盐度 （大于20g •L ‑1） 时， 厌氧氨氧化菌活性会受到抑制， 从而导致整 个厌氧氨氧化体系处理效能变差， 系统失 稳后难以恢复。 当进入厌氧氨氧化反应器内的废水盐度较高， 厌氧氨氧化菌活性会受到严 重抑制。 [0006]因此， 如何能够有效的富集培养耐盐厌氧氨氧化菌成为当前研究的难点和重点。 本发明人基于从事此类产品设计制造多年丰富的实务经验及专业知识， 并配合学理的运 用， 积极加以研究创新， 以期创设一种厌 氧氨氧化菌的富集培养方法， 所培养的厌 氧氨氧化 菌具有良好的耐盐性能并能提高厌氧氨氧化反应 器的脱氮性能。 发明内容 [0007]本发明的主要目的在于克服现有技术中的不足， 提供一种厌氧氨氧化菌的富集培 养方法， 该方法能够培养具有良好的耐盐性能的厌氧氨氧化菌， 并能提高厌氧氨氧化反应 器的脱氮性能。 [0008]本发明的目的及解决其 技术问题是采用以下技 术方案来实现的。 [0009]本发明提供了一种厌氧氨氧化菌的富集培养方法， 所述方法是以含氨氧化菌的活说　明　书 1/5 页 3 CN 115058379 A 3