(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211034302.1 (22)申请日 2022.08.26 (71)申请人 华中药业股份有限公司 地址 441002 湖北省襄阳市襄城区岘山路 118号 (72)发明人 王霜　罗浩　魏宁　冯蕾　田玉林　 孙琼芳　 (74)专利代理 机构 武汉智嘉联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 42231 专利代理师 张璐 (51)Int.Cl. C12P 19/62(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/57(2006.01) (54)发明名称 一种制霉素的发酵制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种制霉素的发酵制备方法， 包括以下步骤： 菌种斜面的制备； 种子液的制备； 发酵液的制备 以及发酵过程中总糖、 还原糖、 油 以及总氮含量的控制。 本发明所述的制霉素发酵 制备方法具有发酵周期短， 制霉素产量高， 发酵 成本低， 适 合工业化生产的特点。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115261432 A 2022.11.01 CN 115261432 A 1.一种制霉素的发酵制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)斜面菌种培养： 取诺尔斯链霉菌接种至培养基中， 进行扩大培养， 培养温度为28～ 30℃， 培养周期为40～48h； 所述培养基包含如下质量百分比的组分： 葡萄糖0.8％～1.5％、 玉米浆0.5％～1.0％、 琼脂1.0％～ 2.0％， 其 余为水； (2)种子液培养： 将培养的斜面菌种接种至种子液培养基中， 控制培养温度28℃～30 ℃， 培养时间为40～48h， 培养结束后得到种子液； 所述种子液培养基包含如下质量百分比 的组分： 葡萄糖1.5％～2.5％、 玉米浆2.0％～2.5％、 酵母膏1.2～1.5％、 磷酸二氢钾 0.04％～0.06％、 硫酸铵0.3％～0.5％、 豆油0.1％～0.2％、 碳酸钙0.2％～0.4％， 其余为 水； (3)发酵培养： 将种子液移种至发酵培养基 中， 所述发酵培养基包含如下质量百分比的 组分： 葡萄糖3.5％～4.0％、 玉米浆2.5％～3.0％、 酵母膏1.5％～1.8％、 磷酸二氢钾 0.02％～0.04％、 硫酸铵0.1％～0.3％、 硫酸铜0.01％～0.03％、 豆油0.1％～0.2％、 碳酸 钙0.2％～0.4％， 其余为水； 培养温度28℃～30℃， 发酵过程中控制还原糖含量为1.0～ 3.0％、 油含量为0.5％～2.0％和总氮含量为20～40mg/100mL； 培养时间为96～120h， 培养 结束后， 即制备 得到所述制霉素。 2.根据权利要求1所述一种制霉素的发酵制备方法， 其特征在于， 步骤(1)所述培养基 包含如下质量百分比的组分： 葡萄糖1.5％、 玉米浆0.5％、 琼脂1.0％， 其 余为水。 3.根据权利要求1所述一种制霉素的发酵制备方法， 其特征在于， 步骤(2)所述种子液 培养基包含如下质量百分比的组分： 葡萄糖1.5％、 玉米浆2.5％、 酵母膏1.5％、 磷酸二氢钾 0.04％、 硫酸铵0.4％、 豆油0.1％、 碳 酸钙0.3％， 其 余为水。 4.根据权利要求1～3任一项所述一种制霉素的发酵制备方法， 其特征在于， 步骤(2)所 述发酵培养基包含如下质量百分比的组分： 葡萄糖3.5％、 玉米浆2.5％、 酵母膏1.6％、 磷酸 二氢钾0.02％、 硫酸铵0.2％、 硫酸铜0.02％、 豆油0.1％、 碳 酸钙0.2％， 其 余为水。 5.根据权利要求4所述一种制霉素的发酵制备方法， 其特征在于， 步骤(1)所述培养基 的pH为7.0～7.2。 6.根据权利要求5所述一种制霉素的发酵制备方法， 其特征在于， 步骤(2)所述种子液 培养基的pH为7.0～7.2。 7.根据权利要求6所述一种制霉素的发酵制备方法， 其特征在于， 步骤(3)所述发酵培 养基的pH为7.0～7.2。 8.根据权利要求1～3任一项所述一种制霉素的发酵制备方法， 其特征在于， 步骤(3)所 述控制还原糖含量的方式为： 通过加入葡萄糖控制。 9.根据权利要求8所述一种制霉素的发酵制备方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 发酵过程 中通过加入大豆油控制油含量。 10.根据权利要求9所述一种制霉素的发酵制备方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 发酵过 程中通过氨水控制总氮含量。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261432 A 2一种制霉素的发酵制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于制霉素制备 领域， 尤其涉及一种制霉素的发酵制备 方法。 背景技术 [0002]制霉素是一种多烯类抗真菌抗生素药物， 在我国 已有多年的生产历史， 并广泛用 于临床。 主要用于内服治疗消 化道真菌感染或外用于表面皮肤真菌感染， 对于念珠菌引起 的胃肠炎、 阴道感染， 以及由于长期使用广谱抗生素所致的念珠菌病的预防和治疗有良好 的效果。 国产制霉素有10余种组分， 其中主要组分分别确 定为:制霉菌素A1、 A3和多真菌素 B。 [0003]目前， 制霉素主要使用发酵方法进行生产， 存在发酵周期长且发酵水平较低等问 题， 为了缩短制霉素的发酵周期， 提高发酵水平， 需要优化发酵培养基配方及发酵过程控 制。 发明内容 [0004]针对现有技术不足， 本发明的目的在于提出一种制霉素的发酵制 备方法， 本发明 能缩短制 霉素发酵周期， 提高发酵水平， 本发明开发出一种适合工业化生产的制霉素发酵 工艺。 [0005]本发明的目的通过以下技 术方案实现： [0006]一种制霉素的发酵制备 方法， 包括如下步骤： [0007](1)斜面菌种培养： 取诺尔斯链霉菌接种至培养基中， 进行扩大培养， 培养温度为 28～30℃， 培养周期为40～48h； 所述培养基包含如下质量百分比的组分： 葡萄糖0.8％～ 1.5％、 玉米浆0.5％～1.0％、 琼脂1.0％～ 2.0％， 其 余为水； [0008](2)种子液培养： 将培养的斜面菌种接种至种子液培养基中， 控制培养温度28℃～ 30℃， 培养时间为40～48h(此时菌浓度达到了12～20％)， 培养结束后得到种子液； 所述种 子液培养基包含如下质量百分比的组分： 葡萄糖1.5％～2.5％、 玉米浆2.0％～2.5％、 酵母 膏1.2～1.5％、 磷酸二氢钾0.04％～0.06％、 硫酸铵0.3％～0.5％、 豆油0.1％～0.2％、 碳 酸钙0.2％～0.4％， 其 余为水； [0009](3)发酵培养： 将种子液移种至 发酵培养基中， 所述发酵培养基包含如下质量百分 比的组分： 葡萄糖3.5％～4.0％、 玉米浆2.5％～3.0％、 酵母膏1.5％～1.8％、 磷酸二氢钾 0.02％～0.04％、 硫酸铵0.1％～0.3％、 硫酸铜0.01％～0.03％、 豆油0.1％～0.2％、 碳酸 钙0.2％～0.4％， 其余为水； 培养温度28℃～30℃， 发酵过程中控制还原糖含量为1.0～ 3.0％、 油含量为0.5％～2.0％和总氮含量为20～40mg/100mL； 培养时间为96～120h， 培养 结束后， 即制备 得到所述制霉素。 [0010]优选的， 步骤(1)中， 培 养基的pH为7.0～7.2。 [0011]优选的， 步骤(2)中， 种子液培 养基的pH为7.0～7.2。 [0012]优选的， 步骤(3)中， 发酵培 养基的pH为7.0～7.2。说　明　书 1/5 页 3 CN 115261432 A 3