(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210979078.7 (22)申请日 2022.06.06 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.22654 2021.0 6.04 (71)申请人 宁波格鲁康生物科技有限公司 地址 315000 浙江省宁波市象山县大徐 镇 城东工业园东浦路9号(自主申报) (72)发明人 王晓娟　 (74)专利代理 机构 河北圆友缘专利代理事务所 (普通合伙) 13173 专利代理师 吴秀兰 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 19/04(2006.01) C12P 5/00(2006.01)A23G 3/42(2006.01) A23G 3/36(2006.01) A61K 36/185(2006.01) A61K 9/20(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 39/00(2006.01) A61K 31/715(2006.01) (54)发明名称 一株干酪乳杆菌及其作为复合口腔益生元 咀嚼片的应用 (57)摘要 本申请公开了一株干酪乳杆菌A1及其作为 复合口腔益生元咀嚼片的应用。 该菌株 保藏于中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC  No.22654， 分类命名为干酪乳 杆菌Lactobacillus  caseiA1， 保藏日期为2021 年06月04， 保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1 号院3号。 该菌株可发酵乌参粉， 并以此制得有别 与乌参粉本身的多糖成分以及二萜 类化合物， 经 过细胞实验其具有抗肿瘤细胞活性性能， 并以此 制备的复合口腔益生元咀嚼片经过动物实验证 实具有抗氧化性能、 醒脑和改善微循环等性能， 具有广泛的药用或保健用产品应用前 景。 权利要求书1页 说明书12页 附图2页 CN 115433695 A 2022.12.06 CN 115433695 A 1.一株干酪乳杆菌A1， 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏 编号为CGMCC  No.22654， 分类命名为干酪乳杆菌Lactobacillus  casei A1， 保藏日期为 2021年06月04， 保藏 地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 2.权利要求1所述的干酪乳杆菌A1在发酵乌参中的应用。 3.根据权利要求2所述的干酪乳杆菌A1 发酵乌参的应用， 包括以下步骤： 配制种子培养液和发酵培养液， 所述种子培养液包含2～8g/L乌参粉， 所述发酵培养液 包含8～15g/L乌参粉； 制备种子悬液， 所述种子悬液由保藏的干酪乳杆菌A1进行菌种活化后， 接种于所述种 子培养液中进行培 养得到； 获得发酵 液， 所述发酵 液是将所述种子悬 液转接至所述发酵培 养液发酵 得到； 得到干燥制品， 所述干燥制品由所述发酵 液进行纯化得到 。 4.根据权利要求3所述的应用， 所述应用还包括收集发酵液， 对其中的菌体进行破碎 后， 分别纯化得到多糖冻干粉和二萜类冻干粉的步骤。 5.根据权利要求 4所述的应用， 其特 征在于， 菌体破碎步骤包括： 将菌体用含溶菌酶的HEPES缓冲液重悬后， 混匀后于30℃处理3h， 使得菌体破裂， 然后将溶液于4℃8000rpm离心10min， 得到菌体的初酶液； 向初酶液中加入 硫酸铵至其饱和度为30％， 并不断搅拌后， 于4℃环境放置2h， 于4℃9000rpm离心20min， 取 得上清液； 得到多糖冻干粉的步骤包括： 取菌体破碎所得上清液与0.1g/mL氯化十六烷基吡啶溶 液混合后， 于室温下放置12h后， 于4℃2000rpm离心3min得沉淀溶解于12.5mL  V(4mol/ LNaCL):V(乙醇)＝100:15溶液中， 同时加入25mL体积分数95％乙醇溶液， 4℃下静置12h后 离心， 沉淀以15mM  NaH2PO4‑Na2HPO4(pH6.25)缓冲液 复溶， 过阴离子交换柱， 以苯酚 ‑硫酸法 检测各管中多糖含量， 合并检测结果达到最高含量10％以及以上各收集管中的溶液， 并以 截留分子质量 为8000～14000Da的透析袋透析处 理， 冻干， 即可 得到所述多糖冻干粉； 得到二萜类冻干粉的步骤包括： 取菌体破碎所得上清液用乙酸乙酯萃取， 室温下连续 萃取3次， 合并萃取 液， 后减压浓 缩得到乙酸乙酯相浸膏， 冻干， 即可 得到二萜冻干粉。 6.权利要求1所述的干酪乳杆菌A1在制备复合口腔益 生元咀嚼片中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其中， 所述复合口腔益生元咀嚼片具有醒脑、 抗氧化和 改善微循环中的至少一项功能。 8.根据权利要求7所述的应用， 其中， 所述复合口腔益生元咀嚼片， 按重量份数计， 包含 二萜冻干粉10～20份， 多糖冻 干粉20～40份， 脱脂乳150～250份， 木糖醇100～200份， 硬脂 酸镁1～5份。 9.根据权利要求7所述的应用， 其中， 所述二萜冻干粉和所述多糖冻干粉由权利要求1 所述的干酪乳杆菌A1在发酵乌参制得。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115433695 A 2一株干酪乳杆菌及其作 为复合口腔益生元咀嚼片的应用 技术领域 [0001]本申请涉及干酪乳杆菌技术领域， 尤其涉及一株干酪乳杆菌及 其作为复合口腔益 生元咀嚼片的应用。 背景技术 [0002]干酪乳杆菌(Lactobacillus  casei)为经典的益生菌之一， 其具有较强的加工性 能， 并且在调节人体免疫系统， 及调节人体肠道环境方而具有突出 的功能一般可在以乳基 质中， 并分泌的胞外酶， 分解 酪蛋白， 以产生多种对血管紧张素I具有抑制作用的各种多肽， 在机体体内具有明显的降血压作用。 干酪乳杆菌还具有抑制肠道病原微生物、 调节肠道菌 群平衡、 增强免疫力的等多种功能。 干酪乳杆菌在大量传统发酵乳制品中占据优势 地位， 因 此具有广泛的来源。 [0003]然而， 仅仅对干酪乳杆菌在乳制品等环境中进行发酵的菌株， 远远不能满足现实 需要， 对其在功能性食品， 如咀嚼片， 功能性药物等 等方面的应用研究仍然存在不足。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本申请实施例的目的在于拓宽对干酪乳杆菌 的研究认知， 以提供其在 多领域的应用， 甚至提供一株新型的干酪乳杆菌 。 [0005]第一方面， 本申请实施例公开了一株干酪乳杆菌A1， 保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC  No.22654， 分类命名为干酪乳杆菌 Lactobacillus  casei A1， 保藏日期为2 021年06月04， 保藏地址为北 京市朝阳区北辰西路1 号院3号。 [0006]第二方面， 本申请实施例公开了所述的干酪乳杆菌A1在发酵乌参中的应用。 [0007]在本申请实施例中， 所述应用包括以下步骤： [0008]配制种子培养液和发酵培养液， 所述种子培养液包含2～8g/L乌参粉， 所述发酵培 养液包含8～15g/L乌参粉； [0009]制备种子悬液， 所述种子悬液由保藏的干酪乳杆菌A1进行菌种活化后， 接种于所 述种子培养液中进行培 养得到； [0010]获得发酵 液， 所述发酵 液是将所述种子悬 液转接至所述发酵培 养液发酵 得到； [0011]得到干燥制品， 所述干燥制品由所述发酵 液进行纯化得到 。 [0012]在本申请实施例中， 所述应用还包括收集发酵液， 对其中的菌体进行破碎后， 分别 纯化得到多糖冻干粉和二萜类冻干粉的步骤。 [0013]在本申请实施例中， 菌体破碎步骤包括： 将菌体用含溶菌酶的HEPES缓冲液重悬 后， 混匀后于30℃处理3h， 使 得菌体破裂， 然后将溶液于4℃8000rpm离心10min， 得到菌体的 初酶液； 向初酶液中加入硫酸铵至其饱和度为30％， 并不断搅拌后， 于4℃环境放置2h， 于4 ℃9000rpm离心 20min， 取得上清液； [0014]得到多糖冻干粉的步骤包括： 取菌体破碎所得上清液与0.1g/mL氯化十六烷基吡说　明　书 1/12 页 3 CN 115433695 A 3