(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210935829.5 (22)申请日 2022.08.04 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M 202 2707 2020.0 5.24 (71)申请人 湖北稻花 香酒业股份有限公司 地址 443112 湖北省宜昌市 夷陵区龙泉镇 申请人 三峡大学 (72)发明人 蔡开云　陈萍　谭光迅　杨博　 严泉　张晓宇　郭子贤　吕育财　 郭金玲　龚大春　 (74)专利代理 机构 宜昌市三峡专利事务所 42103 专利代理师 成钢 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)C12P 7/40(2006.01) C12G 3/02(2019.01) C12R 1/145(2006.01) (54)发明名称 RF1菌及联合科氏梭菌产己酸的方法 (57)摘要 本发明涉及微生物培养领域， 具体的为 Clostridium  senegalense  RF1（RF1）与 Clostridium  kluyveri  DSM555 （KC） 组成二元培 养系统， 结合培养条件优化提高己酸产量。 结果 表明， 通过与梭菌RF1共培养使梭菌KC己酸产量 提高了54.12%； 优化后产己酸条件为： 接种量为 20%， 接种比例KC： RF 1为1： 2 （v/v） ， 酵母浸粉浓度 10g/L， 乙醇浓度2% （v/v） ， 乙酸钠浓度10g/L， 己 酸产量达到4.93g/L， 比优 化前提高了44.5 7%。 本 发明能显著提高克氏梭菌的己酸产量， 帮助养护 浓香型白酒窖池， 提高浓香型白酒的品质。 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 CN 115232772 A 2022.10.25 CN 115232772 A 1.Clostridium  senegalense  RF1， 保藏于中国典型培养物保藏中心 （CCTCC） ， 菌种保 藏号CCTCC NO： 2022707， 保藏日期为202 2年5月24日， 保藏 地址： 中国， 武汉， 武汉大 学。 2.权利要求1所述的 Clostridium senegalense RF1在产己酸上的应用。 3.权利要求1所述的 Clostridium  senegalense  RF1在浓香型白酒养护过程中产己酸 上的应用。 4.Clostridium senegalense RF1联合科氏梭菌在产己酸上的应用。 5.Clostridium  senegalense  RF1联合科氏梭菌在浓香型白酒养护过程中产己酸上的 应用。 6.根据权利要求4或5所述的应用， 其特征在于， 科氏梭菌 Clostridium  kluyveri ， CICC： 10388， 购买自中国工业 微生物菌种保藏管理中心。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， Clostridium  senegalense  RF1在联合克 氏梭菌进行应用的过程中， Clostridium  senegalense  RF1和科氏梭菌 Clostridium   kluyveri  菌株的种子液以接种比1： 0.5 ‑2， 总接种量为5% ‑20%接种于乙醇乙酸钠液体培养 基中， 在3 5‑37℃下培 养5‑14天进行产己酸。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述的乙醇乙酸钠液体培养基包括酵母浸 粉 1‑20 g/L， 无水乙醇0.5% ‑5%， 乙酸钠2.5 ‑30g/L。 9.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， Clostridium  senegalense  RF1菌株的种 子液是将 Clostridium  senegalense  RF1菌株接种到乙醇乙酸钠液体培养基培养所得； 其 中乙醇乙酸钠液体培 养基包括酵母 浸粉 1‑20 g/L， 无水乙醇0.5% ‑5%， 乙酸钠2.5 ‑30g/L。 10.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 科氏梭菌 Clostridium  kluyveri  菌株的 种子液是将科氏梭菌 Clostridium kluyveri 菌株接种 到乙醇乙酸钠液体培养基中培养所 得； 其中乙醇乙酸钠液体培养基包括酵母浸粉  1‑20 g/L， 无水乙醇0.5% ‑5%， 乙酸钠2.5 ‑ 30g/L。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232772 A 2RF1菌及联合科氏梭菌产己酸 的方法 技术领域 [0001]本发明属 于微生物培养技术领域， 特别 涉及Clostridium  senegalense共培养提 高科氏梭菌 Clostridium kluyveri己酸产量的方法 背景技术 [0002]己酸是一种含6个碳的中链脂肪酸， 可作为香料、 抗菌剂、 防腐剂、 生物柴油和生物 塑料等合成的前体， 在 浓香型白酒增香、 化工原料生产、 制药工业、 食品添加剂、 生物燃料等 领域具有广泛应用。 己酸乙酯作为浓香型白酒主要呈香物质， 其含量直接影响浓香型白酒 的价值和品质。 而己酸是己酸乙酯培养的前体物质， 其产量与浓香型白酒生态系统中的己 酸菌有着密切的联系。 目前已报道的来源于浓香型白酒酿造系统的己酸菌主要有 Clostridium  kluyveri(克氏梭菌)、 Ruminococcaceae  bacterium  CPB6、 Caproicibacterium  amylolyticum strain LBM18003、 Caproicibacterium  sp.等。 其中克 氏梭菌是最早报道的广泛存在于浓香型白酒窖池中的产己酸菌， 也是目前研究通过链延长 反应生产己酸的模式菌株。 但克氏梭菌在培养过程中对产 物的生产受到底物的浓度和比例 的影响较大， 当培养液中乙醇或乙酸浓度逐渐增加时， 可能导致克氏梭菌增长速率显著下 降， 进而影响己酸的积累。 因此， 在浓香型白酒的酿造过程中， 单一培养克氏梭菌已经不能 满足需要。 [0003]研究表明， 通过与其他微生物共培养可以提高科氏梭菌培养性能。 Yan等研究发现 Clostridium  kluyveri  H068和Methanogen  166二元共培养培养时己酸产量提高了 61.7％； 嵇翔等通过酿酒酵母和克氏梭菌8022共培养提高己酸产量并分析其机理， 发现共 培养时产酸提高了12.5％。 其中克氏梭菌的培养过程中以乙醇和乙酸盐作为碳源时， 终端 代谢产物主要为己酸和丁酸； 而以乙醇和丁酸作为碳源时， 终端代谢产 物主要为己酸， 因此 将克氏梭菌与产丁 酸菌共培 养可以有效提高己酸的含量， 从而提高浓香型白酒的品质。 发明内容 [0004]本发明的目的在于利用菌株Clostridium  senegalense  RF1与己酸菌科氏梭菌 Clostridium  kluyveri  10388组成二元培养系统， 同时通过调整两种菌的接种比、 接种量， 以及优化培 养培养基的配方， 提高己酸的产量， 从而提高浓香型白酒的价 值与品质。 [0005]Clostridium senegalense  RF1， 保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)， 菌种 保藏号CCTCC NO： 2022707， 保藏日期为202 2年5月24日， 保藏 地址： 中国， 武汉， 武汉大 学。 [0006]本发明提供的又一技术方案是将所述的Clostridium  senegalense  RF1在产己酸 上的应用。 [0007]所述的Clostridium  senegalense  RF1在浓香型白酒养护过程中产己酸上的应 用。 [0008]本发明的又一技术方案是Clostridium  senegalense  RF1联合克氏梭菌在产己酸 上的应用。说　明　书 1/7 页 3 CN 115232772 A 3