(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210599915.3 (22)申请日 2022.05.27 (71)申请人 呼伦贝尔东北阜丰生物科技有限公 司 地址 021000 内蒙古自治区呼伦 贝尔市岭 东工业开发区 （扎兰屯） 开创大街 (72)发明人 赵兰坤　徐庆阳　孙钦波　王小平　 侍述志　刘世周　张婷婷　白红兵　 (74)专利代理 机构 北京领科知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 11690 专利代理师 张丹 (51)Int.Cl. C12P 13/14(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01)C12R 1/15(2006.01) (54)发明名称 L-谷氨酸清洁发酵生产方法 (57)摘要 L‑谷氨酸清洁发酵生产方法。 本发 明属于氨 基酸生产技术领域， 公开了谷氨 酸清洁发酵生产 方法， 包括往发酵罐中流加调节剂 的步骤， 所述 调节剂包括甘油、 柠檬酸锌以及五水硫酸铜中的 任其一或二者以上的组合。 本发 明优化了发酵工 艺， 提高了发酵效率， 并且降低了谷氨酸分离纯 化的难度， 实现了高效率的清洁发酵。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 114836487 A 2022.08.02 CN 114836487 A 1.谷氨酸清洁发酵生产方法， 包括往发酵罐中流加调节剂的步骤， 所述调节剂包括甘 油、 柠檬酸锌以及五水硫酸铜中的任其 一或二者以上的组合。 2.根据权利要求1所述的生产方法， 其特征在于， 所述调节剂包括甘油、 柠檬酸锌以及 五水硫酸铜。 3.根据权利要求1所述的生产方法， 其特征在于， 所述调节剂的组分为： 甘油1 ‑10g/L， 柠檬酸锌1 ‑4g/L， 五水硫酸铜0.2 ‑1.6g/L。 4.根据权利 要求1所述的生产方法， 其特征在于， 所述调 节剂的组分为： 甘油5g/L， 柠檬 酸锌2g/L， 五水硫酸铜0.8g/L。 5.根据权利要求1所述的生产方法， 其特征在于， 所述调节剂的流加速率为0.2ml/ L.min。 6.根据权利要求1所述的生产方法， 其特征在于， 所述调节剂在发酵8h时开始流加， 直 至发酵结束。 7.根据权利要求1所述的生产方法， 其特征在于， 所述方法包括如下步骤： 将谷氨酸棒 杆菌种子液接入装有清洁发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养， 发酵温度为32℃， 待发酵 液OD600＝30时， 提高发酵温度为37.5℃， 直至发酵结束； 整个发酵过程中， 控制通风比1∶ 0.8， 搅拌转速300rpm， 溶氧维持在20％， 流加800g/L的葡萄糖溶液维持残糖为1％， 流加消 泡剂消泡， 同时流加氨水调节发酵 液的pH值至7.2， 直至发酵 结束； 发酵总时间3 6h。 8.根据权利要求7所述的生产方法， 其特征在于， 所述清洁发酵培养基为： 葡萄糖80g/ L， MnSO4·H2O 3mg/L， FeSO4·7H2O 3mg/L， MgSO4·7H2O 2g/L， Na2HPO4·12H2O 4g/L， KCl   2g/L， VB1 10mg/L， 生物素 7 μg/L， 生物 氮素2g/L， 甲硫氨酸0.6g/L。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114836487 A 2L‑谷氨酸清洁发酵生产方 法 技术领域 [0001]本发明属于氨基酸 生产技术领域， 具体涉及L ‑谷氨酸清洁发酵生产方法。 背景技术 [0002]谷氨酸作为氨基酸生产中产量最大的氨基酸， 目前， 制 备谷氨酸最常用的方法是 微生物发酵法。 谷氨酸棒杆菌是谷氨酸发酵 的常规菌株。 影响谷氨酸棒杆菌发酵产酸效率 的因素较多， 主要包括以下几个方面： 1、 微生物在不同的环境条件下、 利用不同底物代谢途 径是不同的， 有目的地对细胞代谢途径进 行修饰和改造， 改变细胞原有的代谢特征， 可以提 高目标产 物的产量和得率； 2、 通过提高菌体的细胞膜 通透性， 增加谷氨酸分泌， 进而解除菌 体内高浓度谷氨酸的反馈调节作用， 提高谷氨酸的产量； 3、 优化发酵培养基、 发酵参数， 使 得菌体增殖速率提高， 从而提高氨基酸的产量。 据 代谢网络定量分析原理， 应用途径分析方 法对L‑谷氨酸生物合成途径进行分析， 确定L ‑谷氨酸生物合成的理想载流途径， 以提高谷 氨酸的发酵效率。 通过L ‑谷氨酸发酵中后 期的代谢流分布与途径分析所得到的理想代谢流 相比较， 寻求代谢流中的扰动因子， 以此指导L ‑谷氨酸高产菌的发酵条件优化， 通过改变L ‑ 谷氨酸发酵过程中的关键节点处的代谢流分配， 以提高产酸水平， 并填补此领域中的研究 空白。 谷氨酸棒杆菌的代谢转向极为显著， 不同的外部环境、 控制条件都极大的影响代谢流 的分布。 L ‑谷氨酸发酵过程是典型的代谢控制发酵， 发酵工艺研究至关重要。 发酵环境条 件， 如培养基组成、 pH、 温度、 溶 氧水平等都明显地影响L ‑谷氨酸的产量。 [0003]申请人之前的专利技术 “谷氨酸的绿色清洁发酵工艺 ”， 有效解决了谷氨酸发酵过 程中的多种问题， 包括谷氨酸合成的反馈抑制、 细胞通透性以及发酵培养基优化， 提高了发 酵效率， 降低了谷氨酸分离纯化的难度； 最高糖酸转化率为68.5％， 最大产酸量为171g/L， 仍有较大提升空间。 [0004]“CN113981019A,一种提高谷氨酸发酵速率的工艺 ”,通过优化培养基提高了发酵 效率， 但是发酵培养基中添加了玉米浆、 豆粕水解液， 会带来较多的色素等杂质， 后续分离 工艺中难以完全去除， 无法达 到清洁发酵的目的。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技术问题在于提供L ‑谷氨酸清洁发酵生产方法， 优化了 发酵工 艺， 提高了发酵效率， 并且降低了 谷氨酸分离纯化的难度。 [0006]本发明是通过如下技 术方案来实现的。 [0007]谷氨酸清洁发酵生产方法， 包括往发酵罐中流加调节剂的步骤， 所述调节剂包括 甘油、 柠檬酸锌以及五水硫酸铜中的任其 一或二者以上的组合。 [0008]优选地， [0009]所述调节剂包括甘油、 柠檬酸锌以及五水硫酸铜。 [0010]更优选地， [0011]所述调节剂的组分为： 甘油1 ‑10g/L， 柠檬酸锌1 ‑4g/L， 五水硫酸铜0.2 ‑1.6g/L。说　明　书 1/4 页 3 CN 114836487 A 3