(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210688920.1 (22)申请日 2022.06.17 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M202 2702 202 2.05.23 (71)申请人 贵州大学 地址 550025 贵州省贵阳市花溪区贵州大 学西校区 (72)发明人 何腾霞　张漫漫　 (74)专利代理 机构 重庆立川知识产权代理事务 所(普通合伙) 50285 专利代理师 李启林 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/02(2006.01) C02F 3/34(2006.01)C02F 3/30(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C02F 101/16(2006.01) (54)发明名称 EN-J1脱氮菌及其在含氮污水处 理中的应用 (57)摘要 本发明属于污水处理技术领域， 具体涉及 EN‑J1脱氮菌及其在含氮污水处理中的应用。 所 述菌株为 Acinetobacter  johnsonii  EN‑J1菌 株， 保藏编号为CCTCC  NO： M2022702。 本发明的菌 株EN‑J1具有优异 的脱氮能力,羟胺和亚硝酸盐 能够增强菌 株EN‑J1的HN‑AD能力。 权利要求书1页 说明书15页 序列表1页 附图4页 CN 115011522 A 2022.09.06 CN 115011522 A 1.一种菌株， 其特征在于， 所述菌株为Acinetobacter  johnsonii  EN‑J1菌株， 保藏编 号为CCTCC NO： M2022702。 2.权利要求1所述的菌株的筛 选方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 采集土壤样品， 置于富集培养基中进行培养； 取富集培养产物在溴酚蓝固体培养基上 划线纯化， 选择并纯化能将溴百里酚蓝固体培养基变成蓝 色且对羟胺和亚硝酸盐的去除效 率均达到80％以上的细菌作为候选菌， 然后从候选菌中筛选在羟胺和亚硝酸盐存在条件下 均可促进异氧硝化 ‑好养反硝化能力的菌株即得 所述菌株。 3.根据权利要求1所述的筛选方法， 其特征在 于， 所述富集培养基包括： HONH3Cl、 NaNO2、 C6H5Na3O7·2H2O、 K2HPO4、 KH2PO4、 MgSO4、 CaCl2和Fe2(SO4)3。 4.根据权利要求3所述的筛选方法， 其特征在于， 所述富集培养基pH为7.0 ‑7.4， 包括 0.045‑0.055g/L  HONH3Cl、 0.09‑0.1g/L NaNO2、 1.5‑2g/L C6H5Na3O7·2H2O、 3‑4g/L K2HPO4、 1‑2g/L KH2PO4、 0.03‑0.07g/L MgSO4、 0.01‑0.02g/L CaCl2和0.005‑0.1g/L Fe2(SO4)3。 5.根据权利要求4所述的筛选方法， 其特征在于， 所述富集培养基pH为7.2， 包括 0.0496g/L  HONH3Cl、 0.0986g/L  NaNO2、 1.836g/L  C6H5Na3O7·2H2O、 3.5g/L  K2HPO4、 1.5g/L  KH2PO4、 0.04g/L MgSO4、 0.014g/L  CaCl2和0.009g/L Fe2(SO4)3。 6.根据权利要求3所述的筛选方法， 其特征在于， 所述溴酚蓝固体培养基包括： BTB试 剂、 (NH4)2SO4、 柠檬酸钠、 KH2PO4、 FeSO4·7H2O、 CaCl2、 MgSO4和琼脂。 7.根据权利 要求6所述的筛选方法， 其特征在于， 所述溴酚蓝固体培养基的pH为7 ‑7.4， 包括0.8‑1.5mL BTB试剂、 0.2 ‑0.3g/L(NH4)2SO4、 2‑3g/L柠檬酸钠、 0.8 ‑1.5g/L KH2PO4、 0.5‑ 1g/L FeSO4·7H2O、 0.05‑0.1g/L CaCl2、 0.3‑0.8g/L MgSO4和15‑20g/L琼脂。 8.根据权利 要求7所述的筛选方法， 其特征在于， 所述溴酚蓝固体培养基的pH为7.2， 包 括1mL BTB试剂、 0.236g/L(NH4)2SO4、 2.45g/L柠檬酸钠、 1g/L  KH2PO4、 0.592g/L  FeSO4· 7H2O、 0.094g/L  CaCl2、 0.488g/L MgSO4和18g/L琼脂。 9.权利要求1所述菌株在含氮污水处 理中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115011522 A 2EN‑J1脱氮菌及其在含氮污水 处理中的应用 技术领域 [0001]本发明属于污水处理技术领域， 具体涉及EN ‑J1脱氮菌及其在含氮污水处理中的 应用。 背景技术 [0002]在生物降解过程中， 羟胺和亚硝酸盐作为异养硝化 ‑好氧反硝化(HN ‑AD)的中间代 谢物， 对大多数氮转化细菌都具有毒性。 且羟胺和亚硝酸盐的积累也可能导致总氮转化效 率降低(Ouyang,L.,et  al,“A study on the nitrogen  removal efficacy  of bacterium   Acinetobacter  tandoii MZ‑5 from a contaminated  river of Shenzhen,Guangdong   Province,China.Biosour ce”,Technology,2 020,315,123888)。 因此， 获取能够同时高效降 解羟胺和亚硝酸盐的HN ‑AD菌株至关重要。 目前， 虽然 具有可持续发展和低能耗特点的好氧 反硝化、 HN ‑AD、 同步硝化反硝化 [0003](SND)菌株等多种新型生物脱氮菌种已被广泛报道， 但是对羟胺和亚硝酸盐的去 除速率普遍较低。 例如， 菌株Bacillus  methylotrophicus  L7、 Pannonibacter   phragmitetus  B1和Acinetobacter  tandoii MZ‑5的亚硝酸盐去除速率分别仅为0.24、 0.81和1.18mg/L/h(Bai  et al.,“High‑efficiency  inorganic  nitrogen  removal by  newly isolated  Pannonibacter  phragmitetus  B1”,Biosour ce Technology,271,91 ‑99； Ren et al.,“The characteristics  of a novel heterotrophic  nitrifying  and  aerobic denitrifying  bacterium,Acinetobacter  junii YB”,Biosource  Technology, 2014,171,1 ‑9)。 Alcaligenes  faecalis  No.4被证实具有降解羟胺的能力， 其对降解羟胺 的最大降解速率为4.7mg/L/h， 但不能去除亚硝酸盐(Joo  et al.,“Characteristics  of  ammonium  removal by heterotrophic  nitrification ‑aerobic denitrification  by  Alcaligenes  faecalis  No.4”,Journal of bioscience  and bioengineering,2005， 100 (2),184‑191)。 虽然羟胺和亚硝酸 盐可以被Pseudo monas taiwanen sisJ488降解， 但它们的 转化速率分别低至0.80和1.28mg/L/h(He  et al.,“Nitrous oxide produced  directly   from ammonium,nitrate  and nitrite during nitrification  and denitrification ”, Hazardous  Materials,2020,388,12211)。 类似地， 尽管放线菌Streptomyces  mediolani   EM‑B2能够去除羟胺和亚硝酸盐， 但相应的最大去除速率仅为0.43和2.01mg/L/h(He  et  al.,“Hydroxylamine  and nitrite are removed effectively  by Streptomyces   mediolani  strain EM‑B2”,Ecotoxicology  and Environmental  Safety,2021a,224, 112693)。 此外， 当羟胺或亚硝酸盐在污水中共存时， 许多细菌存在不能同时去除几种氮源 的局限性。 [0004]迄今为止， 大多数报道主要集中在羟胺或亚硝酸盐对HN ‑AD的影响上， 它们通常表 现出对HN ‑AD过程的抑制作用。 例如， 当培养基中羟胺浓度处于7.5 ‑35mg/L之间时会延迟亚 硝酸盐的还原作用(Noophen  et al ,“Nitrite  oxidation  inhibition  by  hydroxylamine:experimental  and model evaluation ”,Water science  and 说　明　书 1/15 页 3 CN 11